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原创论著 · 开放获取

Brucella Melitensis和Brucella Astructionus在Raw牛奶和奶制品中的流行率

标题、摘要和全文为机器翻译。 英文原文

  • Yaran Majid1
  • Najafi Somayeh2
  • Shoaei Parisa3
  • Ataei Behrooz3
  • Fadaei Nobari Reza4
  • Ramazanpour Javad5
  • Farsi Mehdi4
  • Ahmadi Ahwaz Nasrin4
  • Khorasani Marzieh2
  1. Acquired Immunodeficiency Research Center, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran. ROR
  2. Nosocomial Infection Research Center, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran. ROR
  3. Infectious Diseases and Tropical Medicine Research Center, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran. ROR
  4. Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran. ROR
  5. Infectious Diseases and Tropical Medicine Research Center, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran ROR
下载 PDF (243.1 KB) 引用方式 doi:10.5455/umj.20151004054235

摘要

引言:布鲁氏菌病是一个发病率较高的公共卫生问题. 获得布鲁氏菌病的主要原因是食用未消毒的牛奶和奶制品。 在这项研究中,我们描述了伊斯法罕省对生乳和乳制品中的Brucella.abortus和Brucella.melitensis进行更敏感、快速检测和区分的实时PCR化验。 材料与方法:Taq Man分析及单步PCR(BruAb2 0168BMEII0466基因)共完成了132个未消毒乳品样本和65个乳制品. 样本选自位于伊斯法罕省不同城市的各种市场和动物养殖场. 采集样本的期限将近两个月(2012年5月至6月)。 结果:通过实时PCR 4,132个牛奶标本(3%)对B. melitensis呈阳性. 另外,在65种不同奶制品中抽取的一个油样(1.5%)对B. melitensis呈阳性。 B. briotus的标本无一呈阳性. 我们检测到布鲁塞拉感染的牛奶与不同城市之间的直接和不完全关联(r=0.024,p值>0.05)。 结论:本研究的结果表明,这种病原体在生乳中的存在相对较高。 实时PCR在技术上比目前识别布鲁斯拉物种的标准方法更简单,准确,快捷. 控制该疾病的最有效途径之一是将牛奶和其他乳制品进行消毒或沸腾,供人类消费.

关键词

全文

全文为机器翻译；正式发表的版本为英文原文。 英文原文

导言

布鲁斯洛氏病(Brucellosis)是广泛流行的动物病,对人类和牲畜都有影响,与布鲁斯洛亚物种的感染有关. (1)人类的这种疾病导致发烧、疾病、 myalgia, 并且后来可能导致影响各种组织和器官的亚急性或慢性疾病。 (2)在动物中,堕胎、胎儿死亡和生殖器感染的原因 (3)在目前确定的布鲁斯拉六种物种中,B.melitensis和B.abortus被认为对人类有潜在致病性 (4). B.melitensis和B.abortus可以感染大多数家畜(如山羊,羊和牛). 向人类的传播是通过直接或间接接触受感染的动物或通过食用受污染的牛奶或奶制品,如酸奶和冰淇淋进行的 (5, 6)布鲁氏菌病是一个高发病率的公共卫生问题,食用生牛奶是布鲁氏菌病的主要原因. (7)近几十年来,由于社会经济或政治原因和不同的卫生状况,人类布鲁氏病流行病学发生了严重变化。 (2)虽然根除方案正在欧洲、澳大利亚、加拿大、日本和新西兰等大多数发达国家实施,但布鲁氏菌病仍然是一个重要的健康问题,特别是在发展中国家。 (4, 8)。 。 。

布鲁氏菌病在中亚尤为突出,在地中海盆地、叙利亚、沙特阿拉伯、埃及、利比亚和伊朗仍然非常普遍。 (8–10)伊朗是布鲁氏菌病流行地区. (11)1980年和1991年我国动物乳汁中的布鲁氏菌病发病率分别为6.4%和10.18%。 (12)前一次在Urmia进行的类似研究对B.abortus抗体的牛奶进行了乳环检测。 根据调查结果,该区域牛群的布鲁氏菌病发病率较低(秋季和春季约占1.2%)。 (9)最近对伊朗若干地区(如沙赫雷科德(29.8%)、东阿扎尔巴扬萨拉布(2.2%)和乌尔米亚附近的霍伊市(约29.7%)的布鲁氏菌病研究显示,我国的发病率不同。 (8, 9, 13)。 。 。

在尼日利亚最近对200个牛奶样本(牛群和牛奶销售者)进行的另一项类似研究中,布鲁斯拉抗体的检测结果为13.5%。 (14)布鲁斯拉动物感染对经济有重大影响,特别是在发展中国家,因为它们导致怀孕动物堕胎和牛奶产量下降 (2)由于对牲畜和家畜接种方案的普通筛查,这种疾病在工业化国家是不寻常的。 (15)总之,不再允许例行使用布鲁氏菌病疫苗,尽管接种疫苗可以与监测方案相互作用,但已经制定了几种方法来解决这一困难。 (16)麻黄的特质通常用于对布鲁斯拉物种进行例行鉴定和区分,但与实验室工人感染的风险较高和耗费大量时间有关。 此外,这些试验中的假阴性率也很高,例如MRT的敏感性为87.5%。 (3, 9)最近,建立了分子诊断技术,如实时PCR测定(一种准确、明确和快速的疾病早期诊断工具),以检测布鲁斯拉物种。 (9). 这些易于进行测量,具有高度敏感性,为检测微生物提供了更加具体的特点 (17)。 。 。

目前的研究目的是由B直接检测B.melitenis和流产.

伊斯法罕省小型和大型加工厂和市场的生乳和奶制品中的实时PCR技术。

学习设计

样本收集和研究领域

这次跨部门研究是为了了解伊朗伊斯法罕布鲁氏菌病的流行情况. 为此,从销售未加防腐乳品和奶制品的各种牛奶市场以及位于7个小城市的动物养殖场(包括Lenjan(n:33牛奶)、Freydoonshahr(n:21),Tiran(n:32)、Chadegan(n:10)、Fraydan(n:32)、Khansar(n:17)、Mobarakeh(n:2)和春季相关村庄)随机收集了132份牛奶样品和65份各种牛奶产品(8份传统奶酪样品、21份冰淇淋样品、8份奶油样品、13份奶油样品、6份黄油样品和1份石油样品)。 采集样本的期限将近两个月(2012年5月至6月)。 为了通过实时PCR技术调查B.briotus和B.melitensis的存在,15毫升牛奶被收集到无菌的25毫升带螺旋盖的猎鹰管中. 随后,这些样品被带往伊斯法罕市传染病研究中心的实验室,在被允许休息至少一个小时后,在收集的当天进行了测试。

从牛奶样品中提取基因组DNA

使用经过修改的酚-氯形态方法从牛奶和乳制品中提取了总的基因组DNA. 将一毫升的乳制品与50 μl 20% SDS混为一谈,作为消毒剂。 混合物在孵化后在72°C冷却15分钟. 添加了RNase A(75 μg/ml)和蛋白酶K(650 μg/ml),混合物保存在50 °C为1.5 h. 然后,增加了相等体积的苯酚:氯化物:Isoamyle醇(25:24:1),并震动了20 s,离心机在14000 rpm,10分钟. 超纳特剂被转移到一个新鲜的管子和等量的氯化物中:所有管子都添加了Isoamyle醇(24:1),然后摇动30s,在14000rpm离心机15分钟. 超纳特被转移到一个新鲜的管里,并用异丙醇沉淀. 用七成乙醇洗过三次,在50毫升TE缓冲液中干燥和悬浮 (4)。 。 。

实时 PCR Assay

实时放大时,总反应体积为25μl,内含12.5μl TaqMan®Universal PCR Master Mix(Metabion International AG德国),每个前向和逆向底物的浓度为300纳米(Metabion International AG德国),探测器的浓度为200纳米(Metabion International AG德国),DNA为5μl. 实时PCR按照制造商的协议在实时PCR系统(Qia Gen)中进行. (18). BMEII0466 用于B.melitensis的BMEII0466基因和用于B.abortus的BruAb2 0168基因被选用于构建初级体和TaqManR探测器,用于物种分化(B.Melitensis和B.abortus的独特遗传地块)(表1).

Table 1. 研究中使用的原始探测器和TaqMan®探测器
表1:研究中使用的原始探测器和TaqMan®探测器

结果

在当前的研究中,通过实时PCR方法对132个未破伤风牛奶样本和65个未破伤风牛奶产品样本进行了检测,以识别和区分B.melitensis和B.abortus。 IS711在132份牛奶中的4份(3%)和65份牛奶产品样本中的1份(1.5%)中检测出布鲁斯拉DNA的存在. 伦詹市和汗萨尔市的牛奶样本中布鲁斯拉异种的流行结果分别为3和1个标本. 唯一的正乳制品是来自Lenjan的传统油. 经过与BMEII0466和BruAb2-0168基因的实时PCR后,所有4个确认为B. melitensis的阳性样本. B. briotus的标本无一呈阳性. 我们检测出布鲁塞拉感染的牛奶或牛奶产品与不同城市之间的直接和不完全关联(r:0.024,p:0.78).

讨论情况

在我国,许多由B.abortus和B.melitensis引起的布鲁斯洛氏病病例是职业性或接触受感染动物引起的。 人类布鲁氏菌病对世界普通人口来说,主要来源是未经净化的牛奶或乳制品,用生乳及其衍生物制成 (9)兽医卫生在防治布鲁氏菌病和消除动物中这种动物病方面发挥着重要作用,因为它是控制人类疾病的必要步骤。 (19)。 。 。

本研究的结果显示,本省生乳样品和其他奶制品中布鲁塞拉的总体流行率分别为3%和1.5%。 样本采集地点(不同的小城市或动物养殖场)与受感染的牛奶(p>0.05)之间没有显著关系. 这些结果显示了一个重要的和严重的公共卫生问题。 然而,据报道,我国的牛群疾病流行率相当高,报告不同地区的布鲁氏菌病流行率不同(尿道为1.2%,沙赫科德为29.8%),与不同季节的天气状况没有重大关系。 (13)据报告,土耳其40%的人类布鲁氏菌病病例是食用在不适宜条件下制备的生乳或乳制品所致。 (9)。 。 。

B.melitensis是全世界人类布鲁氏菌病爆发的主要起源. 例如,在包括意大利在内的一些国家,99%的人类布鲁氏菌是B. melitensis引起的。 (2)根据本研究的这些研究,我们没有发现任何B.abortus菌株。 在一些国家,从牛奶或牛奶产品中获取的人类布鲁氏菌病的流行是季节性的,在有些季节,特别是在开玩笑和喂羊达到顶峰之后。 (2)我们无法调查这个问题,因为抽样时间有限是目前研究的限制之一。 虽然对布鲁氏菌病的血清诊断需要使用不止一次的检测,但由于缺乏检测包,无法进行间接牛奶ELISA. 其他测试如RBPT,CFT和SAT仅用于检测血清样本,因此不适合检测牛奶. MRT的灵敏度为87.5%,特异性为98.6% (14)。 。 。

分子技术对于布鲁塞拉等有问题的栽培病原体来说,是充满希望的改变原生物。 (8)在以前进行的关于乳制品的多数类似研究中,特别是在伊朗进行的MRT研究可能产生虚假的正反结果。 这是我国首次通过高度敏感方法(RT-PCR)检测乳制品和其他乳制品中的布鲁塞拉感染的报告. 食用未受污染的乳制品或未受污染的发酵奶是布鲁氏菌感染的主要原因,因为受感染动物的乳制品和其他未受污染的乳制品可能含有大量可行和传染的生物体。 (9, 14)。 。 。

关于人类布鲁氏菌病的各种流行病学研究的结果提到,乳制品的原料消费是布鲁氏菌感染的最可能来源,也是城市地区人类布鲁氏菌病的重大风险因素。 (20)2003年,伊朗不同地区的人类布鲁氏菌病流行率从每100 000人1.5至107.5人(在哈马丹)不等,因此,它可能对农村地区生产者,特别是妇女和儿童的健康构成威胁。 (8)。 。 。

因此,应该大力建议对牛奶和奶制品进行消毒,学会避免食用未经消毒的牛奶和奶制品,对牛群进行疫苗接种和清除感染的动物。 (9)还需要对布鲁氏菌病控制方案进行成功的监测,以确定布鲁氏菌病在牧群中的流行程度。 这些安排将建立基准线信息,以监督下列控制方案的进展情况。

结论

从这项研究可以得出结论,伊斯法罕省受感染的牛奶的流行率几乎很高,因此,应当在该地区开展更多描述性研究(例如调查不同季节的更多乳制品),以便采取适当和有效的控制手段。 我们的结果显示,实时PCR可以成为诊断布鲁氏菌病和B. melitensis和B.briotus的有力工具。

声明

作者贡献（CRediT）
所有作者对全部 14 项 CRediT 角色贡献均等（Conceptualization, Data curation, Formal analysis, Funding acquisition, Investigation, Methodology, Project administration, Resources, Software, Supervision, Validation, Visualization, Writing – original draft, Writing – review & editing）。
资助

Funding information was not reported in the published version of this article.

利益冲突
The authors declare that there is no conflict of interests to publish this article.
伦理批准
Ethics approval details were not reported in the published version of this article.
数据可用性
A data availability statement was not reported in the published version of this article.

参考文献 (20)

20 条参考文献中有 11 条已链接 DOI。

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如何引用本文

Majid Y, Somayeh N, Parisa S, Behrooz A, Reza FN, Javad R, et al. Prevalence of Brucella Melitensis and Brucella Abortus in Raw Milk and Dairy Product by Real Time PCR Technique. Ulutas Med J. 2016;2(1):7-11. doi:10.5455/umj.20151004054235

Majid, Y., Somayeh, N., Parisa, S., Behrooz, A., Reza, F. N., Javad, R., Mehdi, F., Nasrin, A. A., & Marzieh, K. (2016). Prevalence of Brucella Melitensis and Brucella Abortus in Raw Milk and Dairy Product by Real Time PCR Technique. The Ulutas Medical Journal, 2(1), 7–11. https://doi.org/10.5455/umj.20151004054235

Majid, Y. et al. (2016) 'Prevalence of Brucella Melitensis and Brucella Abortus in Raw Milk and Dairy Product by Real Time PCR Technique', The Ulutas Medical Journal, 2(1), pp. 7–11. doi: 10.5455/umj.20151004054235.

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