The Ulutas Medical Journal p-ISSN 2149-0430 e-ISSN 2149-388X

The Ulutas Medical Journal · ISSN 2149-0430 (basılı), 2149-388X (çevrimiçi) · https://www.ulutasmedicaljournal.com/?mno=201961

Araştırma Makalesi · Açık erişim

Brucella Melitensis ve Brucella Abortus in Raw Milk and Dairy Product by Real Time PCR Technique

Başlık, özet ve tam metin makine çevirisidir. İngilizce aslı

  • Yaran Majid1
  • Najafi Somayeh2
  • Shoaei Parisa3
  • Ataei Behrooz3
  • Fadaei Nobari Reza4
  • Ramazanpour Javad5
  • Farsi Mehdi4
  • Ahmadi Ahwaz Nasrin4
  • Khorasani Marzieh2
  1. Acquired Immunodeficiency Research Center, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran. ROR
  2. Nosocomial Infection Research Center, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran. ROR
  3. Infectious Diseases and Tropical Medicine Research Center, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran. ROR
  4. Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran. ROR
  5. Infectious Diseases and Tropical Medicine Research Center, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran ROR
PDF indir (243.1 KB) Nasıl atıf yapılır doi:10.5455/umj.20151004054235

Özet

Giriş: Brucellosis yüksek bir vaka ile halk sağlığı sorunudur. Bir brucellozis satın almanın başlıca nedenleri, süt ve süt ürünlerinin tüketimi aracılığıyladır. Bu çalışmada, I. eyaletindeki ham süt ve süt ürünlerinde daha hassas, hızlı bir tespit ve Brucella.abortus ve Brucella.melitensis. Malzemeler ve Yöntemler: Bir Taq Man analizi ve tek adım PCR (BruAb2 0168BMEII0466 gen) toplam 132 adet unpasteurized süt örnekleri ve 65 süt ürünleri gerçekleştirdi. Örnekler, I. eyaletindeki farklı şehirlerde bulunan çeşitli pazarlardan ve hayvan çiftliklerinden seçilmiştir. Örnek koleksiyonun süresi neredeyse iki ay idi ( Haziran 2012'ye kadar). Sonuçlar: Gerçek zamanlı PCR 4 132 süt örneği (%3) B. melitensis için olumluydu. Ayrıca 65 farklı süt ürünleri arasında bir petrol örneği (1.5%) B. melitensis için olumluydu. Örneklerden hiçbiri B. abortus için olumlu değildi. brucella enfekte süt ve farklı şehirler arasında doğrudan ve eksik korelasyon tespit ettik (r=0.024, p değeri >0.05). Sonuç: Mevcut çalışma sonuçları, bu patojenin ham sütte göreceli yüksek bir varlığını göstermiştir. Gerçek zamanlı PCR teknik olarak Brucella türlerinin tanımlanması için mevcut standart yöntemlerden daha basit, doğru ve hızlı. Hastalığı kontrol etmek için en etkili rotalardan biri, insan tüketimi için pastörizasyon veya süt ve diğer süt ürünlerinin kaybedilmesini içerir.

Anahtar kelimeler

Tam metin

Tam metnin makine çevirisidir; geçerli sürüm İngilizce asıldır. İngilizce aslı

Giriş Giriş

Brucellosis hem insanlar hem de hayvan hayvanları için yaygın bir zoonotik hastalık, Brucella türü ile ilişkili (1)İnsandaki bu hastalık ateş, malaise, myaljiye neden olur ve daha sonra çeşitli dokular ve organlar etkileyen kronik veya kronik hastalıklara yol açabilir. (2)Hayvanlarda, kürtaja, fetal ölüme ve genital enfeksiyonlara neden olur. (3)Brucella'nın altı türü arasında şu anda B.melitensis ve B.abortus, insanlara potansiyel olarak yolojenik olarak kabul ediliyor. (4)B.melitensis ve B.abortus, çoğu yerli hayvanı enfekte edebilir (örneğin, keçi, koyun ve sığır). İnsanlara geçiş, enfekte hayvanlarla doğrudan ve dolaylı temas yoluyla veya yoghurt ve dondurma ürünleri tüketimiyle gerçekleşir. (5, 6). Brucellosis yüksek bir hasta halk sağlığı sorunu ve ham sütün tüketimi, elde edilen brucellozisin ana nedenidir. (7)Son yıllarda, insan brucellozisin epidemiyolojisi sosyoekonomik veya siyasi nedenlerle ve farklı hijyenik statüler nedeniyle ciddi bir şekilde değişti. (2)Avrupa, Avustralya, Kanada, Japonya ve Yeni Zelanda gibi en gelişmiş ülkelerde posta programları uygulanırken, brucellozis özellikle gelişmekte olan ülkelerde önemli bir sağlık sorunu olmaya devam ediyor. (4, 8).

Brucellosis özellikle Orta Asya'da ortaya çıktı ve Akdeniz havzasında, Suriye, Suudi Arabistan, Mısır, Libya ve İran'da hala çok yaygındır. (8–10)İran, brucellosis için endemik bir bölgedir (11)1980 ve 1991'de ülkemizdeki brucellozların yaygın oranları sırasıyla yüzde 6,4 ve% 10.18 idi. (12)Urmia'da yapılan bir önceki benzer çalışma, süt yüzük testi (MRT) ile B.abortus antikorları için süt inceledi. Sonuçlarından sığırdaki brucellozis prevalı düşüktü (her iki sonbahar ve ilkbahar mevsimlerinde yaklaşık% 1.2). (9). İran'ın bu tür Shahrekord'un birkaç yerinde brucellosis'in diğer çeşitli çalışmaları (29,8), Doğu Azarbayjansarab (2.2) ve khoy şehri, Urmia'nın yakınlardaki yaklaşık 29.7%'si, ülkemizde farklı prevalans gösterdi. (8, 9, 13).

200 süt örneği üzerinde yapılan başka benzer bir araştırmada (babaları ve süt satıcılarından) Nijerya'da toplam 13.5% Brucella antikor antikorları için olumluydu. (14)Hayvanlardaki Brucella enfeksiyonları özellikle gelişmekte olan ülkelerde hamile hayvanlarda kürtaja ve süt üretimine neden olduğu gibi önemli bir ekonomik etkiye sahiptir. (2). Hastalık, normal hayvan ve evcil hayvan aşı programları nedeniyle endüstrileşmiş ülkelerde olağandışıdır. (15)Her neyse, brucellosis'e karşı rutin aşılar artık izin verilmiyor, aşılamaya rağmen gözetim programıyla etkileşime girebilir, bu zorluğu çözmek için birkaç yaklaşım geliştirildi. (16). phenotypic özellikleri genellikle Brucella türlerinin rutin tanımı ve farklılığı için kullanılır, ancak laboratuvar işçilerinde yüksek bir enfeksiyon riski ve çok zaman harcıyor. Ayrıca bu testlerde yanlış negatif oranı 87.5% hassasiyetle yüksek e.g MRT. (3, 9)Son zamanlarda, gerçek zamanlı PCR gibi moleküler tanı teknikleri (Hastalığın erken tanısı için doğru, kesin ve hızlı bir araç) Brucella türlerinin tespiti için kuruldu. (9)ölçümler yapmak oldukça hassastır ve mikro-organizmlerin tespiti için daha spesifikite sağlar. (17).

Mevcut çalışmanın amacı, B.melitensis ve Abortus'un B.

Çiğ süt ve süt ürünlerinde gerçek zamanlı PCR tekniği I. eyaletinde küçük ve büyük işleme tesisleri ve pazarları.

Çalışma Tasarımı

Örnek koleksiyon ve çalışma alanı

Bu kesitsel çalışma, I., İran'daki brucellosisin yaygınlığını bilmek için yapıldı. Bu amaçla, 132 süt örneği ve 65 çeşitli süt ürünleri (8 geleneksel peynir örneği, 7 küçük şehirde bulunan 21 tane dondurma örneği, krem, 6 tereyağ örneği (n:21), Tiran (n:32), Chadegan (n:10), Fraydan (n:32), Telasar (n:17), Mobarak (n:2) ve ilkbahar sezonunda ilgili köyler dahil edilmiştir. Örnek koleksiyonun süresi neredeyse iki ay idi ( Haziran 2012'ye kadar). B. abortus ve B.melitensis'in Gerçek Zaman PCR tekniği tarafından varlığını araştırmak için, 15 ml süt ve vida kapakları ile steril 25 ml sahte tüpler toplandı. Örnekler daha sonra en az bir saat dinlendikten sonra koleksiyonun aynı gününde test ettikleri soğuk bir zincirde I. şehrini araştırma merkezine alındı.

Genetik DNA'nın Süt Örneklerinden Çıkarılması

Toplam genomik DNA, değiştirilmiş bir ol-koform yöntemi kullanarak süt ve süt ürünlerinden alındı. Bir litre süt ürünü 50 μl% 20 SDS ile denaturing agent olarak karıştırılır. Bu karışım, 72 °C'de 15 dakika boyunca soğutulmuştu. RNase A (75μg/ml) ve proteinase K (650 μg/ml) eklendi ve karışım 1.5 h için 50 °C'de tutuldu. Sonra, eşit hacim Phenol: Chloroform: Isoamyle alkol (25:24: 1) 10 dakika boyunca 20 s ve sentrifuged için 14000 rpm eklendi. Supernatant taze bir tüpe transfer edildi ve eşit bir hacim kloroform: Isoamyle alkol (24: 1) tüm tüplere eklendi, sonra 30s ve sentrifuged için 14000 rpm. Supernatant taze bir tüpe transfer edildi ve isopropanol ile önceden alındı. Kırklar üç kez% 70 etanol ile yıkanmış ve 50 μl'de TE tampon (4).

Gerçek zamanlı PCR Assay

Gerçek zamanlı amplifikasyon, her bir ileri ve ters astar (Metabion International AG Germany), 5μl TaqMan® Universal PCR Master Mix (Metabion International AG Germany), bir 300 nM konsantrasyonunu her bir ileri ve tersine çeviren (Metabion International AG Germany), 5μl Taqion International AG Germany), 5μl DNA'nın 200 nM konsantrasyonu. Gerçek zamanlı PCR, üreticinin protokolüne göre Real Time PCR sisteminde (Qia Gen) gerçekleştirilmiştir. (18)BMEII0466 B.melitensis ve BruAb2 0168 B.abortus için gen, astars ve TaqManR Pros for types blank (unique Genetic loci of B.Meliteensis and B.abortus) (Table 1) için seçildi.

Table 1. Çalışmada kullanılan Primer ve TaqMan® probes
Tablo 1: Çalışmada kullanılan Primer ve TaqMan® probes

Sonuçlar Sonuçlar Sonuçlar Sonuçlar

Mevcut çalışmada, 132 unpasteurized süt örneği ve 65 unpasteurized süt ürünü örneği, B.melitensis ve B.abortus'un kimlik ve farklılığı için gerçek zamanlı PCR yöntemi kullanılarak test edildi. Brucella DNA'nın varlığı, IS711 tarafından 4'te 132 süt (%3) ve 65 süt ürün örneği (1.5%). Lenjan ve Khansar şehirlerin süt örneklerindeki Brucella genus prevalanlarının sonuçları sırasıyla 3 ve 1 örnekti. Sadece olumlu süt ürünü Lenjan'dan gelen geleneksel bir petroldü. BMEII0466 ve BruAb2-0168 tüm 4 olumlu örnek B. meliteensis olarak kabul edildi. Örneklerden hiçbiri B. abortus için olumlu değildi. brucella enfekte süt veya süt ürünleri ve farklı şehirler arasında doğrudan ve eksik korelasyon tespit ettik (r:0.024, p:0.78).

Tartışma Tartışma Tartışma

Ülkemizde, B.abortus ve B. melitensis tarafından kaynaklanan Brucellosis'in birçok vakası, bu tür hayvanlarla iş veya iletişim kurmak. Ortak dünya nüfusu için insan brucellozunun başlıca kaynakları, ham sütü ve türevlerinden hazırlanan süt veya süt ürünleridir (9). Veteriner sanitasyon, brucellosis'e karşı mücadelede önemli bir role sahiptir ve bu zoonotik hastalığın hayvanlarda ortadan kaldırılması, çünkü insanlarda hastalığı kontrol etmek için önemli bir adımdır. (19).

Mevcut çalışmanın sonuçları, ham süt örnekleri ve bölgemizdeki diğer süt ürünlerinin genel prevalanlarının sırasıyla% 3 ve% 1.5 olduğunu göstermiştir. Örnek toplantıların yerleri arasında önemli bir ilişki yoktu (farklı küçük şehirler veya hayvanlar çiftliği) ve enfekte sütler (p>0.05). Bu sonuçlar önemli ve ciddi bir halk sağlığı sorunu ortaya çıkardı. Bununla birlikte, sığırdaki hastalık prevalansı ülkemizde oldukça yüksek olduğu bildirilmiştir, farklı bölgelerde farklı prevaloz oranları rapor edildi (yaklaşık% 1.2 arasında urmia'da shahekord) farklı mevsimlerde hava durumu ile önemli bir ilişki yoktu. (13)Türkiye'deki insan brucellozis vakalarının yaklaşık% 40'ı için uygun olmayan koşullarda hazırlanan ham süt veya süt ürünlerinin tüketiminin sorumlu olduğu bildirildi. (9).

B.melitensis, dünya çapında brucellosis'in insan salgınlarının başlıca kaynağıdır. Örneğin, İtalya dahil bazı ülkelerde insan brucellozis% 99'u B. melitensis'e neden oluyor. (2). Mevcut çalışmada bu çalışmalara uygun olarak, herhangi bir olumlu B.abortus gerginlik bulamadık. Bazı ülkelerdeki süt veya süt ürünlerinden elde edilen insan brucellozisin yaygınlığı mevsimseldir ve özellikle de kidding ve kuzuya ulaştıktan sonra bazı mevsimlerde. (2)Bu konuyu, mevcut çalışmanın kısıtlamalarından biri olan örnekleme dönemi nedeniyle araştıramadık. brucellozisin serolojik tanısı bir testten daha fazla kullanılmasına ihtiyaç duymasına rağmen, dolaylı süt ELISA test kitlerinden yararlanamaz. RBPT, CFT ve SAT gibi diğer testler sadece serum örneklerini test etmek için kullanılır ve bu nedenle süt test etmek için uygun değildir. MRT'nin duyarlılığı 87.5% iken spesifikliği 98,6 idi. (14).

Moleküler teknikler, brucella gibi sorunlu yetiştirme patojenleri için umut verici değişikliklerdir. (8). Özellikle İran'da süt ürünleri üzerinde yapılan önceki benzer çalışmaların çoğu, yanlış pozitif veya olumsuz sonuçlar üretebilecek şekilde yapılır. Bu, ülkemizde son derece hassas bir yöntem (RT-PCR) tarafından süt ve diğer süt ürünlerinde brucella enfeksiyonunun tespitinin ilk raporudur. Mikroteurize süt ürünleri veya unboiled mayınsız sütün tüketimi, brucelloz ile enfeksiyon ana nedenidir, çünkü enfekte hayvanların süt ve diğer sağlıksız süt ürünleri çok sayıda uygulanabilir ve bulaşıcı organizmalar içerebilir (9, 14).

İnsan brucellozis üzerindeki çeşitli epidemiyolojik çalışmaların sonuçları, ham süt ürünlerinin tüketilmesinin, kentsel bölgede insan brucellosis için en olası Brucella enfeksiyonun kaynağı olduğunu ve kentsel bölgede insan brucellosis için önemli risk faktörü olduğunu belirtti. (20). İran'ın farklı bölgelerindeki insan brucellozisin yaygınlığı, 2003 yılında yüzde 107.5'e kadar 1.5.000'e kadar değişmekteydi, bu nedenle kırsal alanlarda üreticilerin sağlığı için bir tehdit olabilir. (8).

Süt ve süt ürünlerinin geçmişleri, süt ve süt ürünlerinin tüketilmesinden kaçınmayı, enfekte hayvanların aşılanmasını ve enfekte hayvanların ortadan kaldırılması son derece tavsiye edilmelidir. (9). Ayrıca, onda brucellosisin yaygınlığını belirlemek için başarılı bir brucellosis kontrol programı gözetimi gereklidir. Bu düzenlemeler aşağıdaki kontrol programlarının ilerlemesini denetlemek için temel çizgi bilgileri yaratacaktır.

Sonuç Sonuç Sonuç

Bu çalışmada, I. ilindeki enfekte sütlerin prevalanının neredeyse yüksek olduğu sonucuna varılabilir, bu nedenle daha fazla tarif edilen çalışma (farklı mevsimlerde daha fazla süt ürünleri soruşturması gibi) bu bölgede doğru ve etkili kontrol anlamına gelmeli. Ayrıca sonuçlarımız gerçek zamanlı PCR'nin brucellosis ve B. melitensis ve B. abortus tanısı için güçlü bir araç olabileceğini öne sürüyor.

Beyanlar

Yazar katkıları (CRediT)
Tüm yazarlar 14 CRediT rolünün tamamına eşit katkıda bulunmuştur (Conceptualization, Data curation, Formal analysis, Funding acquisition, Investigation, Methodology, Project administration, Resources, Software, Supervision, Validation, Visualization, Writing – original draft, Writing – review & editing).
Fon desteği

Funding information was not reported in the published version of this article.

Çıkar çatışması
The authors declare that there is no conflict of interests to publish this article.
Etik kurul onayı
Ethics approval details were not reported in the published version of this article.
Veri erişilebilirliği
A data availability statement was not reported in the published version of this article.

Kaynaklar (20)

20 kaynağın 11 tanesi DOI bağlantılı.

  1. Baddour M M, Alkhalifa DH. Evaluation of 3 PCR techniques for detection of Brucella DNA in peripheral human blood. Can J Microbiol, 2008; 54(5):352-7. PubMed Google Scholar
  2. Seleem MN, Boyle SM. Brucellosis: a reemerging zoonosis. Vet Microbiol, 2010,27;140(3-4):392-8. DOI Crossref PubMed Google Scholar
  3. Doosti A, Moshkelani S. The First Prevalence Report of Direct Identification and Differentiation of B.abortus and B. melitensis using Real Time PCR in House Mouse of Iran. WASET 2011,50:84 -7 PubMed Google Scholar
  4. Rijpens NP, Jannes G, Van Asbroeck M, Rossau R, Herman LM. Direct detection of Brucella spp. in raw milk by PCR and reverse hybridization with 16S-23S rRNA spacer probes. Appl Environ Microbiol. 1996; 62(5):1683-8. DOI Crossref PubMed Google Scholar
  5. Young, EJ. Human B rucellosis. Rev Infect Dis1983;5:821-42. PubMed Google Scholar
  6. Arimi SM, Koroti E, Kang'ethe EK, Omore AO, McDermott JJ. Risk of infection with Brucella abortus and Escherichia coli O157:H7 associated with marketing of unpasteurized milk in Kenya. Acta Trop. 2005; 96(1):1-8. DOI Crossref PubMed Google Scholar
  7. Minas M, Minas A, Gourgulianis K. Epidemiological and clinical aspects of human brucellosis in Central Greece. Jpn J Infect Dis. 2007;60(6):362-6. DOI Crossref PubMed Google Scholar
  8. Doosti A, G hasemi Dehkordi P. Application of REAL-TIME PCR for identification and differentiation of Brucella abortus and Brucella melitensisin cattle. Bulgar J Vet Med, 2011; 14(2): 109−115. PubMed Google Scholar
  9. Akbarmehr J. The prevalence of Brucella abortus and Brucella melitensis in local cheese produced in Sarab city, Iranand its public health implication. African J MR, 5(12), 1500-1503, 18, 2011 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  10. Pappas G, Papadimitriou P, Akritidis N, Christou L, Tsianos EV. The new global map of human brucellosis. Lancet Infect Dis, 2006; 6(2):91-9. DOI Crossref PubMed Google Scholar
  11. Bokaie S, Heydari Latibari S, Abbaszadeh S, Mousakhani H, Rabbani M, SharifiL. Ecological study of brucellosis in humans and animals in Khoy, a mountainous District of the IR of Iran. IJM, 2009;1(4):14-17. PubMed Google Scholar
  12. Refai M. Incidence and control of brucellosis in the Near East region. Vet Microbiol, 2002; 90(1-4):81-110. DOI Crossref PubMed Google Scholar
  13. Maadi H, Moharamnejad M, Haghi M.Prevalence of Brucellosis in Cattle in Urmia, Iran. Iran Pak Vet J, 2010; 31(1): 81-82. PubMed Google Scholar
  14. Bertu WJ, Dapar M, Gusi AM, N gulukunS, Leo S. Prevalence of brucella antibodies in marketed milk in Jos and environs. Afr J Food Sci, 2010; 4(2): 62-64. PubMed Google Scholar
  15. Corbel MJ. Brucellosis: an overview. Emerg Infect Dis 1997; 3:213-21. PubMed Google Scholar
  16. Blasco JM. Control and eradication strategies for brucella melitensis infection in sheep and goats. Prilozi. 2010; 31(1):145-65. DOI Crossref PubMed Google Scholar
  17. Leal-Klevezas DS, Martínez-Vázquez IO, López-Merino A, Martínez-Soriano JP. Single-step PCR for detection of Brucella spp. from blood and milk of infected animals. J Clin Microbiol. 1995; 33(12):3087-90. DOI Crossref PubMed Google Scholar
  18. Hinić V, Brodard I, Thomann A, Cvetnić Z, Makaya PV, Frey J, Abril C. Novel identification and differentiation of Brucella melitensis, B. abortus, B. suis, B. ovis, B. canis, and B. neotomae suitable for both conventional and real-time PCR systems. J Microbiol Methods. 2008; 75(2):375-8. DOI Crossref PubMed Google Scholar
  19. Shareef JM, 2006. A Review of serological investigations of brucellosis among farm animals and humans in Northern provinces of Iraq (1974-2004). J Vet Med B, 53: 38-40. DOI Crossref PubMed Google Scholar
  20. Sofian M, Aghakhani A, Velayati AA, Banifazel M, Eslamifar A, Ramezani A. Risk factors for human brucellosis in Iran. Int J Infec Dis. 2008,12:157-161. PubMed Google Scholar

Tam metni okuyun

PDF'yi burada aç

PDF yükleniyor…

PDF burada görünmezse yukarıdaki indirme düğmesini kullanın.

Bu makaleye nasıl atıf yapılır

Majid Y, Somayeh N, Parisa S, Behrooz A, Reza FN, Javad R, et al. Prevalence of Brucella Melitensis and Brucella Abortus in Raw Milk and Dairy Product by Real Time PCR Technique. Ulutas Med J. 2016;2(1):7-11. doi:10.5455/umj.20151004054235

Majid, Y., Somayeh, N., Parisa, S., Behrooz, A., Reza, F. N., Javad, R., Mehdi, F., Nasrin, A. A., & Marzieh, K. (2016). Prevalence of Brucella Melitensis and Brucella Abortus in Raw Milk and Dairy Product by Real Time PCR Technique. The Ulutas Medical Journal, 2(1), 7–11. https://doi.org/10.5455/umj.20151004054235

Majid, Y. et al. (2016) 'Prevalence of Brucella Melitensis and Brucella Abortus in Raw Milk and Dairy Product by Real Time PCR Technique', The Ulutas Medical Journal, 2(1), pp. 7–11. doi: 10.5455/umj.20151004054235.

RIS (EndNote, Zotero) BibTeX JATS XML
Bu makaleyi sitenize ekleyin

Bu kodu sayfanıza yapıştırın. Kart başlığı, yazarları ve DOI'yi gösterir ve makaleye bağlantı verir.

Uyumsuzluk bildir
Makale gönder İletişim