对感染性肥料/Embryo转移病人的杂交材料进行遗传分析的科学依据

导言

大约15%的头三个月自然周期怀孕导致自发堕胎。 29-60%的经常流产材料中发现染色体畸形 (1)有趣的是,大多数数字偏差是重新出现,而不是被继承 (2)在人工受精/Embryo转移(IVF-ET)周期中,头三个月自发堕胎率略高于自然周期。 (3)这种差异可能是由于IVF-ET周期中的患者群体在年龄,激素和遗传特征方面与自然周期不同. 此外,让这一组患者在接受IVF-ET治疗之前接受进一步研究,可能是造成费率差异的另一个原因. 虽然在大多数流产中,由新变异引起的中微粒首先出现 (4)我们并不清楚地知道影响孕育过程中遇到遗传异常的因素。 第一次堕胎是增加neuploidy风险的最重要因素。 虽然第一次怀孕导致细胞遗传性流产,但在随后的妊娠中堕胎的风险增加,不会增加同样数量的遗传异常风险。 (1)有趣的是,随着堕胎数量的增加,POC的染色体异常检测数量减少。 因此,流产率随着以前自发流产次数的增加而增加。 相反,在POC中发现异常细胞遗传学发现的频率显著下降,而正常的karyo型则随着先前流产次数的大幅增加. (1) 这些数据表明,经常发生堕胎病例是由于与生殖器官有关的结构性和激素因素,而不是遗传因素。 其中一个伙伴的染色体异常的存在导致POC中大约5%的异常. 在经常发生的流产中,至少有一对夫妇可能有4.7%的染色体缺陷。 (5)这些比率大多适用于自然周期的堕胎。 虽然IVF-ET周期被认为与自然周期有相似的流产率,但其中任何一个伙伴的karyo型与POC的karyo型之间的联系并不明确. 这项研究旨在调查在20岁以前曾堕胎的IVF-ET任一伴侣的karyo型之间的关系。^编号 POC的妊娠周和细胞遗传学发现。

材料和方法

这一回顾性分析评估了2015年1月至2019年12月期间发生IVF-ET后流产的不育妇女. 与会者在知情的情况下表示同意,这项研究是根据经2000年修订的1975年《赫尔辛基宣言》适当版本中所述的道德标准进行的。 Erciyes大学医学院伦理委员会批准了道德标准(核准日期和期号;2020-439)。 从月经周期第2至第3天开始,所有参与者都按照标准对抗协议得到单独剂量的重组FSH(rFSH)治疗。 Gonadoprophin-releasing 荷尔蒙对抗剂乙酰乙酸酯(Cetrotide, Merck,德国)于5日开始使用.^编号 或6个^编号 刺激的日子。 当至少3个卵泡直径达到17毫米时,会诱发卵泡的成熟,其重组剂为hCG(Ovitrelle, Merck-Serono, 250 mg, Modugno, BA, 意大利)。 在HCG应用35-36小时后进行了Oocyte采集. 卵形卵泡是使用单管17毫米针头(Cook Medical, Bloomington, IN, USA)呼吸的,由转录超声波学(TV-USG)指导. 所有血清β-HCG患者在月经延迟后都接受了妊娠评估。 β-HCG呈阳性结果的病人接受了TV-USG,临床怀孕在胎儿心脏跳动的情况下得到考虑。 根据胚胎转移日期进行了几周的妊娠,并得到了USG的确认. 对流产的诊断是通过妇科检查和跨阴道超声学确定的。 这项研究包括了192名在怀孕前20周接受体外授精治疗和堕胎的不育妇女。 研究的基本标准如下:(一) 在其个人或家庭历史上有堕胎史的人,(二) 接受过IVF/ET手术的老年病人,(三) 有以前异常或死胎史的人,(四) 夫妇要求评估。 不包括在研究范围内的病例是:(一) 夫妇不想接受这种检验;(二) 有明显的妇科和荷尔蒙原因可能导致堕胎的病例;(三) 将堕胎材料从医院以外的病例。 堕胎的原因包括完整、不完整、缺失和反复发生的流产。 表1显示按周分列的堕胎类型分布情况,其中122次是第一次堕胎,70次是两次或两次以上堕胎。

患者按照流产的妊娠周分为三组. 5-7周之间的堕胎病人为45人,8-12周之间的121人,13-19周之间的26人。 同样,在经常发生流产的情况下,他们按照流产的周数分为3组。 5-7周之间经常流产的患者数量为15,49人8-12周,6人13-19周. 对流产后孕育产物(POC)中的胆固醇(chorionic villi)进行细胞遗传学分析时,使用荧光原位杂化(FISH)进行基因组混合(CGH)比较分析. 对20多个处于元相的细胞进行了检查和报告。 还检查了每个伴侣的周边血型分析。 将亲子细胞遗传学发现与从胎儿组织取得的细胞遗传学发现进行比较。 评估了父母的karyo型与从孕育产品中获得的karyo型之间的关系。

统计评价

利用NCSS(数字Cruncher统计系统)2007年统计软件(Utah,美国)软件包进行了统计分析。 除了数据评价中的描述性统计方法(平均,标准偏差,中位数,方位范围)外,独立 t测试还被用于将变量的配对组与正常分布进行对比,Mann-Whitney U测试用于将组与非正常分布的变量进行配对比较. 在比较定性数据时使用了Chi-square和Fisher精确的测试. 评估结果的重要性为p<0.05。

结果

按妊娠周分列的堕胎类型分布情况见表1,所有病例的人口特征见表2。 参与者的年龄在20-44岁之间. 胎儿细胞基因检查的材料平均在5至19周之间。 在流产的192名IVF-ET患者中,122人第一次流产(第1组),70人曾经流产2次或2次以上(第2组)。

身体质量指数、母亲年龄、孕酮水平、内膜厚度、总卵细胞计数、近亲婚姻、双胞胎和吸烟等2组。 第一个流产组的hCG日的Estradiol值高于经常流产组(p=0.035). 经常流产的风险为2,29人(0,91-5,86人),即2,28人。 (1–5, 14) 双胞胎和吸烟的1.92(1,02-3,65)。

虽然在30名首次流产的病人中有22人(73.33%)发现卡约型异常,但85例中有65例(76.47%)在8-12周之间第一次流产,7例中有5例(71.42%)在13-19周之间第一次流产,但卡约型异常。 虽然在第一次堕胎的122例(75.4%)中,有92例出现卡约型异常情况,但其余30例(24.59%)没有发现病理。 虽然在70例流产(表4)的POC中发现了28例karyo型异常,但42例(60%)没有发现病理学。 对有流产史的192对夫妇进行了Karyo型分析。 在19名父母中发现了Karyo型异常,其中10名为女性,9名为男性。 10分之7(70%)的孕育结果与细胞遗传异常。 在9个有父性细胞遗传异常的病例(33.3%)中,仅在3个病变材料中发现了细胞遗传异常。 性别与细胞学发现之间的统计比较是不可能的,因为获得的karyo类型彼此有很大的不同. 在存在不同的基因分析报告的情况下,只能在群体之间比较异常病例的数量. 虽然在预产期母亲出现karyo型异常的情况下,POC的细胞遗传异常风险为70%,但在男性伴侣出现karyo型异常的情况下,POC的细胞遗传异常风险约为33%。 差异不大(p=0,25)。 但是在POC中细胞遗传异常的风险为4,67(0,67-22,37),在有karyo型异常的女性中比有karyo型异常的男性伴侣高4倍.

在19名父母中,有10名父母的Karyo型异常情况被发现(52.6%)。 另一方面,在两个伙伴中发现的karyo型异常情况与POC中发现的karyo型异常情况大多没有重叠。 10名卡约型妇女中有5人曾经有过流产的历史。 同样,9名卡约型异常男子中有4人流产。 细胞遗传学发现出现在父母的流产材料中,卡约型异常(表5和表6)。 192名患者中有20人有近亲婚姻,其中只有8人有染色体畸形。

讨论情况

大约10%的生殖期妇女在受孕过程中出现细胞遗传异常(POPC) (6)多数中微子素怀孕要么死于子宫,要么导致流产 (3)如果首次在POC中进行基因评估,那么一半以上的病例可以发现染色体异常. (7)在第一次流产材料中发现正常卡约型的情况下,在接下来的妊娠中观察到染色体正常多氯联苯的风险增加。 (8)。最常见的三聚体是POC中的三聚体16 (9)此外,一些活产中出现三 somy 21、18和13 (10)在研究中,我们进行了回顾性分析,以审查先流产和反复流产的患者在孕期产物中染色体异常的频率与父母的kayo型异常情况有关。 我们研究了122个第一次流产的怀孕和70个连续两次或两次以上头三个月流产的怀孕。 研究了首先出现异常/正常胚胎型和反复发生流产的频率。 对POC进行了染色体分析,使用了FISH技术。 在192名IVF-ET患者中,有122人第一次流产,70人曾经两次或两次以上流产。 大约70%的头三个月流产细胞遗传异常可在POC中检测到。 (1) 在这项研究中,在怀孕头12周内堕胎的POC病例的细胞遗传异常发生率为75.4%。 这一比率比文献数据高出5%。 由于我们系列的所有流产都是在IVF-ET之后发生的,这种差异可能取决于参与者的个性特征. 因为IVF-ET病例中的大多数个体年龄都比自然周期要大,并且有一群患者更有可能接受基因研究. 据报道,至少有一名流产伴侣的染色体异常检测率约为5%. 在经常流产的情况下,至少有一个伴侣的细胞遗传问题率很高。 (5)在我们的研究中,19人发现了细胞遗传异常,包括10名女性和9名男性。 这一比率与文献相符 (5)在我们的研究中,POC的结构染色体异常是卡约型异常妇女最常见的发现。 另一方面,POC中的数值染色体缺陷是雄性伴侣中发现细胞遗传学异常的最常见的发现. 与经常发生的流产相比,染色体异常的发生率在第一次流产的情况下要高得多。 同样,与细胞遗传学发现异常的女性伴侣相比,流产材料中正常胚胎卡约型的频率显著上升。 虽然在预产期母亲出现karyo型异常的情况下,POC的细胞遗传异常风险为70%,但在男性伴侣出现karyo型异常的情况下,POC的细胞遗传异常风险约为33%。 这一差异在统计学上是微不足道的,但发现在具有Karyo型异常的妇女中,细胞遗传异常的风险是4,67倍。

根据这些发现,我们可以争辩说,母亲的karyo型问题比父亲的问题更经常地反映在胎儿身上。 虽然无法明确解释原因,但我们可以争辩说,健康细胞的存在可以在一定程度上纠正细胞异常精子的消极影响. 然而,这一假设显然需要详细调查。

虽然在某些情况下也有类似的karyo型,但是属于父母的细胞遗传异常和在POC中发现的异常是独立的. 例如,Karyotype在流产材料中为47,QQ21,其中母亲有46,XX,父亲有46,XY,16qh+karyotype. 在大多数误诊病例中,POC中也发现了父母体内的数染色体异常. 有趣的是,结构染色体缺陷有时作为数字染色体缺陷出现在POC中. 例如,在母亲的POC中,46,XX,inv(9) (p11q13)异常,47,XXY karyo型被检测到. 这些数据表明,简单的结构染色体在父母体内的异常可能与被转移至胎儿时相同,或者可能回到更严重的数值异常. 根据所有这些数据,建议对有第一次或反复流产史的个人进行细胞基因分析是没有错误的。 因此,我们可以发现,在第一次POC中,夫妇在下次怀孕时出现结构染色体异常时出现更严重的karyo型异常的概率. 通过为这些病例提供植入前遗传诊断咨询,我们可以帮助他们生出健康的婴儿.

在怀孕的前19周,流产材料中的异常karyo型的比例为75.4%。 在按照妊娠周进行分组分析时,发现异常的karyo型接触率相似。 换句话说,在POC中,怀孕头5-7周期间堕胎的妇女的卡约型异常检测率与13-19周的情况相似(73.33%对71.42%)。

在第一次流产的病例中,POC中异常卡约型的总比率为75.4%(92/122),任何伴侣中与异常染色体结果有关的异常细胞遗传学发现率为52.63%(10/19)。 虽然父母体内存在karyo型异常,但在9个POC(47.4%)中没有发现染色体异常. 我们可以将这些数据解释如下: 如果父母中有任何一方有karyo型异常,大约一半的婴儿有细胞遗传异常的风险,而另一半则没有任何风险。 在怀孕的头20周里,192个流产病例中有120个在POC中出现kayo型异常(62.5%). 在120例中,只有10例父母一方患有karyo型异常(8.3%),其余110例父母患有正常的karyo型(91.7%)。 IVF-ET周期发生的杂化现象比自然周期更有可能在一个伙伴体内出现karyo型异常。 因此,在POC染色体异常的病例父母中无需进行kayo型分析.

本次研究发现,与初次堕胎者(40%对75.4%)相比,经常流产者出现karyo型异常的风险较低。 根据我们的调查结果,文献数据也显示在RM病例中存在正常的karyo型. (11, 12)尽管在70例反复堕胎的病例中,有28例发现卡约型异常(40%),但有42例报告为正常卡约型(60%)。 POC中发现染色体异常的频率可能正在下降,因为大多数RM病例的病原学是由于存在抗磷脂抗体,内分泌病理或子宫异常. (13, 14)有趣的是,与5-7周的反复流产相比,POC13-19周的卡约型异常率(40-16.6%)有所下降。 在7号发生第一次流产的情况下发现karyo型异常情况的速度^编号 怀孕周至8-12岁^编号 发现几周类似。 换句话说,孕期前7周或8-12周之间流产的发生,并不改变POC细胞遗传异常的发生速度. 因此,在所有头三个月的流产中,医生必须根据患者的历史和临床经验决定是否进行细胞遗传分析. 另一方面,由于在RM病例的晚孕周中卡约型异常的风险较低,进行卡约型分析并不能提供任何额外好处. 地毯 (2) 与无染色体畸形患者相比,报告患有父母染色体重排的患者的活产率没有明显降低。 鉴于我们的结果和文献数据,我们可以提出,父母的监护可能无法很好地预测随后怀孕的结果。 然而,为了得出明确的结论,应当对所有随后的POC进行细胞遗传学检查.

虽然Karyotying是管理自发或反复流产的一部分,但我们的结果显示,父母的Karyotying在诊断根本原因方面价值有限。 IVF-ET之后,POC的中微血球率比自然自发流产高出约5%(70%对75.4%)。 这一差异可能与IVF-ET周期的性质有关. IVF-ET周期发生的流产比自然周期(5%对8.3%)更有可能在其中一方发生karyo型异常。

与细胞遗传学发现异常的女性伴侣相比,流产材料中正常胚胎卡约型的频率显著提高。 由于POC中的karyotying是胎儿中微子的间接预测器,其预测值是有限的。 最后,我们不建议对参加IVF-ET周期的妇女在POC中进行例行的监护。 我们的研究是针对更多病人进行的。 然而,有必要进行多中心研究,以确定患者的长期预测。