The Ulutas Medical Journal p-ISSN 2149-0430 e-ISSN 2149-388X

The Ulutas Medical Journal · ISSN 2149-0430 (basılı), 2149-388X (çevrimiçi) · https://www.ulutasmedicaljournal.com/?mno=134160

Araştırma Makalesi · Açık erişim

Mikro-Injected Adipose-Derived Mesenchymal Stem Hücreleri Ovarian Ischemia /Reperfüzyon Ratlarda Yaralanan Etkileri

Başlık, özet ve tam metin makine çevirisidir. İngilizce aslı

  • Burcu Kasap1
  • Sukru Kasap1
  • Seda Vatansever2
  • Remziye Kendirci2
  • Osman Yilmaz3
  • Meryem Calisir3
  • Ummuhani Ozel Turkcu4
  • Melike Nur Akin5
  • Eren Akbaba5
  • Nilgun Ozturk Turhan5
  1. Muğla Sıtkı Koçman Üniversitesi ROR
  2. Department of Histology-Embryology, School of Medicine, Celal Bayar University, Manisa, Turkey. ROR
  3. Department of Laboratory Animal Science, School of Medicine, Dokuz Eylul University, İzmir, Turkey. ROR
  4. Department of Clinical Biochemistry, School of Medicine, Mugla Sitki Kocman University, Mugla, 48000, Turkey ROR
  5. Department of Obstetrics and Gynecology, School of Medicine, Mugla Sitki Kocman University, Mugla, 48000, Turkey ROR
PDF indir (871.1 KB) Nasıl atıf yapılır doi:10.5455/umj.20211019101154

Özet

Giriş: Yazarlar immünhistokimya, histolojik ve ovarian ischemia / reperfüzyon sıçan modeline sahip antioksidan ve anti-inflamatuar özellikleri olan bir kök hücresinin biyokimyasal etkilerini araştırmışlardır. Malzemeler ve Yöntemler: Ratlar rastgele sham, ADSC, torsion/detorsion, torsion/detorsion/ADSC gruplarına tahsis edildi. ADSCs, 6'lık bir torsion/detorsion/ADSC'nin 6'lık bir torsion periyodundan sonra detorsiyon prosedürü sırasında ele alındı. BrdU, caspase-3, TUNEL, eNOS ve iNOS lekesi kullanıldı. Gelişmiş oxidasyon protein ürünleri (AOPPs), süperoksit dismutase (SOD) aktivitesi ve toplam sulfhydril seviyeleri değerlendirildi. Sonuçlar: Serum AOPP, torsion/detorsiyon, doku ve serum AOPP seviyelerinde torsion/detorsion/ ADSC grubu azaldı. Torsion/detorsion ve torsion/detorsion/ADSC grupları, sham grubuna kıyasla önemli ölçüde azaldı. INOS, torsion/detorsion grubundaki torsion ve detorsion sonrasında daha da güçlendi, ancak ADSC mikroinjeksiyonu/ADSC grubunda azaldı. Torsion-detorsion sonrası ADSC tedavisi de caspase-3 immünreaktiviteyi ve apoptotik hücre sayısını azalttı. Sonuç: Torsion/detorsion sonrası ADSC uygulaması, ischemia/reperfüzyon yaralanmasından vazgeçebilir.

Anahtar kelimeler

Tam metin

Tam metnin makine çevirisidir; yayımlanmış asıl sürüm İngilizce metindir. İngilizce aslı

Giriş Giriş

Fnexa'nın Torsionı, fallopn tüpün ve ovary'nin rotasyonu, jinekolojik acil durumlar için 2.7-3 hesap (1)Çoğu durumda üreme yaşlarda gerçekleştiğinden, erken tanı ve etkili tedavi ovarian rezervini ve hormonal işlevleri korumak için önemlidir. Salpingo-oophorektomi, tromboembolizm ve potansiyel yetersizlik risklerinden dolayı daha önce tercih edilen yönetim seçeneğiydi; ancak son çalışmalar hastalar için ovarian detorsiyonunu tavsiye ediyor (2). ovarian torsion, gangrene ve necrosis ile venous ve lenfatik occlusion ve sonraki arter yetersizlik, ischemiaiaia nedeniyle ovarian rezervinin kaybına neden olabilir (3)Reperfüzyondan sonra, birçok reaktif oksijen türü (ROS), yani hidroxyl radikaller, hidrojen peroksit ve süperoksik radikaller, oksijen seviyelerinin artması nedeniyle gelişmiştir. (4, 5)Yüksek ROS DNA hasarına, endotelal yıkıma ve granulosa hücrelerine neden oldu. (6, 7)ovarian detorsiyon operasyonlarının sonuçlarını geliştirmek için, birçok umut verici anti-inflamatuar ve antioksidan ajanlar atorvastatin, Galega officinalis, Olea euroea ve enoxaparin(8–11)İnsan adipose-derived kök hücreleri (ADSCs) insan adipoz dokudan, tümotransplantasyon ve rejeneratif tıp için uygun olabilecek bir tür üstün biyomalzeme olarak türetilmiştir. (12)ADSCs temel kültür koşulları altında gerçekten genişledi, düşük bir kirlenme riski sergiledi ve nakil sonrası düşük bağışıklık reddedilmesi var. (13) ADSC'ler ayrıca antioksidan ve anti-inflamatuar özelliklere sahiptir ve son zamanlarda karaciğer ve beyindeki birçok sıçan I / R modelinde kullanılmıştır (12, 14)Stem hücreleri, Asherman sendromunda olduğu gibi obstetrik ve jinekolojik uygulamalar için de araştırılıyor ve erken ovarian başarısızlığı ve erken ovarian başarısızlığı (15–17)Ayrıca, önceki çalışmalar, ADSC'lerden gizli olan cytokinelerin doğal ovarian yaşlanma sürecine karşı direnebileceğini gösterdi. (18)Son zamanlarda insan ADSC-derived exosomes, prematüre ovarian başarısızlığının proliferasyon oranını artırarak ve insan granulosa hücrelerinin apoptoz oranını engellemiştir. (19).

Bu çalışmada, ovarian torsion/detorsiyon cerrahisinin neden olduğu I/R yaralanmasının etkilerini araştırmak istedik.

Malzemeler ve Yöntemler

Hayvanlar

Toplam 25 yetişkin, bakire, 10-12 hafta yaşlı kadın Wistar albino sıçanları bu çalışmada tahsis edildi. Hayvanlar (170-210 g) 20-24°C, 12. gün / gece çevrimleri ve% 50-60 nem koşulları altında evlendi. Dokuz Eylül Üniversitesi Hayvan Araştırmaları Komitesi bu çalışma için hayvan protokolünü onayladı (Approval no. 28/2015). Hayvan araştırmaları, Dokuz Eylül Üniversitesi İnsan Bakım Komitesi ile uyumlu deneysel yönergelere uygundur.

ADSC Isolation

ADSCs, deneysel gruplara tahsis edilmemiş beş sıçandan izole edildi. Anesthesia intraperitoneal 10 mg/kg (Rompun, Bayer, Leverkusen, Almanya) xylazine hidrochlorid ve 50 mg/kg ketamin yönetimi (Ketalar, Eczacibasi, Türkiye). Tampon çözüm cerrahi site hazırlığı için kullanıldı ve ikili groin yağ pedleri kaldırıldı. Adipose dokular steril fosfat-buffered salin (PBS)% 5 penicillin-streptmisin ile yoğun olarak işlendi.

Dokular kafa derisiyle ve α-MEM'de 30 dakika boyunca α-MEM'de% 0.1 oranında kolajen edildi.2 2Daha sonra kültür için medyaya transfer edildi (20% fetal bovine serum (FBS), α-MEM,% 1 L-glutamine) ve% 5 COĞRAFLIĞI sonra, α-MEM/10% FBS, 50 μg/ml streptmisin ve 50 U/ml penicillin'de 37°C ve% 5 CORAN2 2 (20)Medya, 10 günlük yetiştirme döneminde her iki gün değiştirildi.

ADSC'lerin Karakterizasyonu

Hücreler PBS'de 30 dakika boyunca 4 paraformdedede düzeltildi ve 15 dakika boyunca 0.1 Triton X-100 (A4975, AppliChem, Darmstadt, Almanya PBS ile yıkamaktan sonra. Hücrelerin endojen peroxidase aktivitesi, % 3 hidrojen peroksit (K31355100, Merck, Darmstadt, Almanya) ile 5 dakika oda sıcaklığı ile yükseltildi. Daha sonra, hücreler PBS ile yıkandı. Yıkamadan sonra, hücreler, üreticinin talimatlarına uygun olarak serumu 1h'i engellemek için ikna edildi (85-9043, Invitrogen, Camarillo, CA, USA). Anti-CD-34 (ab51037, Abcam) ve anti-CD-44 (BA3382, BOSTER) birincil antikorlar 1:25 ve 4°C bir gecede 1:25 ve 4°C dilsel olarak uygulandı. (20)İlk antikorlar kaldırıldı ve hücreler PBS ile yıkandı. Biotinylated keçi IgG, anti-rabbit/mouse IgGsanary antibody ve peroxidase-conjugated streptavidin (D01- 110, Life Science Division), her adım 30 dakika boyunca tartışıldı. Hücreler bu incubasyon dönemleri arasında PBS ile üç kez yıkandı. Sonra, örnekler Diaminobenzidine /hidrojen peroksit (00-20, Invitrogen) ile 5 dakika boyunca tartışılmıştır. Mayer'in hematoxylin (HMM999, Scytek Laboratories, West Logan, Utah, ABD) karşıtlık için kullanıldı. Dokunmuş sularda yıkanmış, monte edilmiş orta (AML060, Scytek) ve ışık mikroskopı (Olympus BX40, Olympus Corp., Tokyo, Japonya). Aynı prosedürler birincil antikorlar yerine aynı tip IgG kullanan kontrol örnekleri için uygulandı.

Tedavi Grupları

Hayvanlar rastgele dağıtıldı: grup 1 (sham, saline n: 4), grup 2 (ADSCs, n:7), grup 3 (resion + detorsion + salin, n:6), grup 4 (dersion + detorsion + ADSCs, n:8).

Cerrahi Prosedür Prosedürü

Ratlar, ADSC Isolation'da açıklandığı gibi genel anestezi altında cerrahi uygulandı. Enjeksiyondan sonra ve cerrahi siteleri Tanving çözümü ile temizlemeden sonra (Bation, Drogsan, Türkiye), 2.5-cm orta dikey kesmeler yapıldı.

Grup 1: Uterine mısırları ve adnexa görselleştirildi. Sonra, 20 μl salinleri bir mikroinjektör ile ayrı olarak uygulandı. Grup 2: Fnexa'yı açığa çıkardıktan sonra, 1 x 105 5 20 μl PBS'de hücreler / ml ADSC'ler ( ADSC'lerin 2000 hücreleri dahil) ayrı olarak bir mikroinjektör ile yumurtalıklara uygulandı. (13, 21).

Grup 3: Torsion oluşturmak için, bağlantılı gemilerle adnexa 720° saatlik bir şekilde döndü ve 5/0 ipek sutures tarafından arka duvarına döndü. Kar duvarı kırıldı. 6h bir torsion periyodundan sonra, bir re-laparotomi detorsiyon için (reperfüzyon) yapıldı ve ovaries 720° sayacı ve her iki yumurtalık da açığa çıktı. Sonra, 20 μl salin ayrı uygulandı.

Grup 4: 6h torsion ve detorsiyon prosedürleri yukarıda açıklandığı gibi yapıldı. ovaries detorsiyon prosedüründe maruz kaldıktan sonra, 1 x 105 5 20 μl PBS'de hücreler / ml ADSCs (2000 ADSCs 2000 hücreleri) ayrı olarak mikroinjektör ile uygulandı. (13, 21).

Abdominal duvar kesleri hepsi 3/0 ipek suratlarla kapalıydı. Cerrahi iyileşmeden sonra, hayvanlar ayrı olarak evlendi. Kurtarma süresinin 7 gün sonra, tüm hayvanlar laparotomi'yi geçirdi ve ooforectomies yapıldı. Tüm prosedürler aynı araştırmacılar tarafından gerçekleştirilmiştir. Eşleştirilmiş yumurtalıklardan biri rastgele seçilmiş ve onbeş rekolojik ve immünhistokimyasal analiz için 10% tamponlaştırılmış formalin çözümünde sabitlenmiştir, diğer biri daha biyokimyasal analiz için yağlanmış folyo kağıdında paketlenmişken. Sadece hipovolemik şok ile sıçanların yasaklanmasından önce, 2 ml kan aşağı vena cava'dan çekildi. 5000 rpm'de kan örneklerinin 15 dakika sonra, serum Eppendorf tüplerinde toplandı. Eppendorf tüpleri ve yağlanmış folyo kağıtlarının paketleri, son biyokimyasal analize kadar kuru dondurmaya aktarıldı.

Histopathological sınav

Doku örnekleri,% 48 saat boyunca% 10 tamponlaştırılmış bir formalin çözümünde düzeltildi ve paraffin'de eklendi. Paraffin blokları 5μm-thickness (Leica RM2125RTS, Leica Biosystems, Nusloch, Almanya). Hematoxylin ve eosin lekesi rutin bir protokol olarak kullanılmıştır. Bölümler ovarian hasarının şiddeti, edema, inflamasyon, hemorrhage ve kongestion gibi incelendi. Tüm bölümler ışık mikroskobu (Olympus BX40, Tokyo, Japonya) görüntü analizi yöntemi kullanılarak incelendi (Image-Pro Plus 5.1). Doku bölümleri aynı deneyimli histolog tarafından analiz edildi.

Immunohistokim Analiz

immünhistokimyasal analiz için, Terminal deoxynüotidyl transferase dUTP nick end etiketi (TUNEL), Bromode oxyuridine/5- Bromo-2'-deoxyuridine (BrdU), caspase-3, Endotheli nitrik oksit sintzo sintase (eNOS), ve inducible nitrik oksit sintase (iNOS) lekelemeleri kullanıldı. immünlabeling'in yoğunluğu şöyle not edildi: zayıf (+); orta (++); ve güçlü (+++). Bu grading, deneysel koşullara kör olan iki gözlemci tarafından gerçekleştirilmiştir.

TUNEL Assay

Kanatlar Entellan® (Merck 107961.0500) ile monte edildi ve iki histolog tarafından bağımsız olarak incelendi. 100 TUNEL- negatif veya pozitif hücreler rastgele seçilmiş alanlarda davada sayılırdı. TUNEL-pozitif hücrelerin yüzdesi belirlendi.

Biyokimya Analizi

Ovarian dokular 20 mM fosfat pH 7.4'te tampon edildi. Homojenize örnekler, 4000 rpm'de yüzde0 0 0 0 C for 15 min. Yüzde sonra, supernatants süperoksidan dismutase (SOD) aktivitesi, gelişmiş oxidasyon protein ürünleri (AOPP), toplam sulfhydril (TSH), ve toplam protein seviyeleri, granülomaz (MPO) aktivitesi için kullanıldı.

SOD Aktivitesinin İncelenmesi

ovarian dokularının veya serumun SOD aktivitesi spektrfofofofotometrik olarak ölçülmekteydi. (22)ovarian ve serum'daki SOD aktivitesi, sırasıyla birimler / mg protein ve ünite/mL olarak verildi.

TSH

TSH ovarian doku veya serum seviyeleri azalmış glutathione kullanarak oluşturulan lineer standart bir eğri ile değerlendirildi. (23). Sodyum dodecyl sulfate ile supernatants'daki protein seviyeleri Lowry ve al al al al'a göre ölçülmekteydi. (24)TSH seviyeleri μmol / mg protein ve μmol /L olarak sırasıyla doku veya serum için ifade edildi.

AOPP Seviyeleri

ovarian dokudaki AOPP seviyeleri ve serum Witko-Sarsat (25).

MPO Etkinliği

Bradley'nin yöntemi, ovaryo aktivitesini ölçmek için kullanıldı. (26).

Total Protein Assay

ovarian dokudaki toplam protein seviyeleri spektrfofofofofotometrik yönteme göre ölçülmekteydi. (27).

İstatistiksel Analiz

Yazarlar, önceden değerlendirdikleri sıçanlardan elde edilen sonuçların örnek boyutunu belirlediler. Farklılıklardan, 0.05'in iki ayarlı α değeri ve 0.20 değeri (study gücü:% 80). SPSS sürüm 22.0 yazılımı (Chicago, IL, USA) kullanıldı. Dağıtım normalliği Shapiro-Wilk testi ile değerlendirildi. Sonuçlar ± standart hata veya medyan (min-maximum) olarak verilir. Deneysel gruplar arasındaki farklar, değişkenlik (ANOVA) ve Tukey'in post hoc testleri tarafından belirlenir. Kruskal- Wallis, parametrik olmayan verileri analiz etmek için kullanıldı. p<0.05 önemli olarak kabul edildi.

Sonuçlar Sonuçlar Sonuçlar Sonuçlar

ADSC Karakterizasyon Sonuçları

ADSCs CD 34 (-) (negative) ve CD 44 (+) (pozitif) (Fig.1) idi. ADSCs, CD34 (-) olarak hematopoitik kök hücreler olmadığını ve CD44 (+ olduklarından bu yana bir genetik kök hücreler olduğunu doğruladı.

Şekil 1: A: Brd-U, B:CD44, C:CD34, D:Control Sence
Figure 1. A: Brd-U, B:CD44, C:CD34, D:Control Sence

Histolojik Sonuçlar

brüt muayenede, 1, 2 ve 4 gruptan daha az iskemmikti. ovarian folikülleri ve küçük kan gemilerinde ovarian stroma'daki ovarian roma'daki oksidasyonlar grup 1'de gözlemlendi, ancak bu değişiklikler gruptaki ADSC yönetiminden sonra azaldı. Intensely stromal fibroblast birikimi, infiltrasyon ve grup 3'teki apoptotik hücreler diğer gruplardan 4'ten sonra azaldı (Figure 2).

Şekil 2: Grup 1, Grup 2, Grup 3 ve Grup 4: X400 orijinal magnification
Figure 2. Grup 1, Grup 2, Grup 3 ve Grup 4: X400 orijinal magnification

Immunohistokim Sonuçlar

ovarian doku apoptoz analizi Şekil 3'te gösterilmiştir. Grup 1 ve 2. gruplardaki birincil, ikincil veya Graafian foliküllerinde TUNEL-pozitif hücreler gözlemlendi. Bununla birlikte, apoptotik hücreler koro radiata'da tespit edildi ve Graafian folikülleri ve grubun birincil folikülleri 3. Grup 4'te, TUNEL- pozitif hücreler sadece Graafian foliküllerinde tespit edildi, ancak grup 3'ten daha düşük sayılarda bulundu. Immunohistokimyasal dağıtımları iNOS, eNOS, Caspase-3 ve BrdU sırasıyla Şekil 3'te gösteriliyor. TUNEL, iNOS, eNOS, Caspase-3 ve gruplardaki BrdU lekeleme seviyeleri Tablo 1. BrdU lekesi sadece 2 ve 4 gruplarda pozitifti, stromal enjeksiyondan sonra ovarian dokudaki ADSC'lerin varlığını onayladı.

Table 1. TUNEL seviyeleri, iNOS, eNOS, Caspase-3 ve BrdU deneysel gruplar halinde
Tablo 1: TUNEL seviyeleri, iNOS, eNOS, Caspase-3 ve BrdU deneysel gruplar halinde
Şekil 3: ovarian dokusunun grup 1, grup 2, grup 3 ve grup 4'ten sonra TUNEL assay: X400.
Figure 3. Grup 1, grup 2, grup 3 ve grup 4'ten sonra ovarian doku analizi: X400.

Biyokimyasal Sonuçlar

dokudaki AOPP seviyeleri ve tüm grupların serumu sırasıyla Tablo 2 ve 3'te sunulmaktadır. AOPP'nin Düzeyleri Grup 3'te Grup 2'den daha yüksekti (p<0.05), Grup 4'teki AOPP seviyeleri gruplar 1 ve 3'ten daha düşüktü (p<0.05) (Table 2). Serum AOPP grup 3'te grup 1 ve 2'den daha yüksekti (p<0.05), Grup 4'teki ADSC'lerle tedaviden sonra Grup 3'e kıyasla önemli ölçüde azaldı (p<0.05) (Table 3). SOD ve MPO faaliyetleri ve TSH seviyeleri doku ve tüm gruplardaki serum, sırasıyla Tablo 2 ve 3'te sunulmaktadır. Tcon SOD aktivitesi grup 3'te Grup 1'den önemli ölçüde daha düşüktü (p<0.05). Ayrıca, 4 grupta SOD aktivitesinin Grup 1 ve 2 gruplarından önemli ölçüde daha düşük olduğunu bulduk (p<0.05) (Table 2). Grup 3'teki ovarian dokudaki MPO etkinliği grup 2'den daha büyüktü (p<0.05 (Table 2).

Table 2. Tound AOPP, MPO, SOD ve TSH seviyeleri deneysel gruplarda
Tablo 2: AOPP, MPO, SOD ve TSH seviyeleri deneysel gruplar halinde
Table 3. Serum AOPP, SOD ve TSH seviyeleri deneysel gruplar halinde
Tablo 3: Serum AOPP, SOD ve deneysel gruplarda TSH seviyeleri

Tartışma Tartışma Tartışma

ADSC'lerin antioksidan ve anti-inflamatuar özellikleri olduğundan dolayı, ovarian torsion/detorsion cerrahisi tarafından neden olan I/R yaralanmasının zararlı etkilerini artırabilir ve şu çalışma bunu doku ve serum AOPP'yi protesto ederek doğruladı. Bu nedenle, bir ovarian torsion modelinde ADSCs ile birlikte nant tedavi, hem doku hem de serumda ROS azaltarak ovarian hasarını azaltabilir, apoptotik hücrelerin sayısını ve enflamatuar süreci azaltır. Son zamanlarda insan infertilitesi ve üreme sistemi üzerindeki ADSC’nin etkileri ve mekanizması hakkında birçok görüş rapor edilmiştir. Manavella ve al tarafından yapılan bir çalışmada, ADSC insan gemilerine ayırır ve insan ovarian doku ile birlikte fare peritoneum'a iki adım ovarian doku gresyonu kullanarak birlikte nakil edildiğinde VEGF'in salgılanmasını teşvik eder. (28)ADSC'nin potansiyel olarak ovarian doku kalitesini ve yaşam kalitesini artırabileceğini söylediler. Manavella ve al'ın bir başkasında, yazarlar, yüksek miktarda oksijenasyon ve ovarian dokularını ADSC ile erken post-gresyon döneminde gösterdiler, ki bu da folikül hayatta kalmakta ve apoptosis azaltıldı. (29)Dahası, Sun ve al, ADSC çarşaflarının endometrium hücrelerinin yenilenmesine, kas hücrelerine yenilenmesini ve anjiyojeni teşvik ettiğini ve aynı zamanda daha iyi gebelik sonuçlarıyla sonuçlandı. (30)Bu verilerden anlaşıldığı gibi, ADSCs insan üreme sistemi ve infertilite üzerinde olumlu etkilere sahip görünüyor.

Yüksek ROS seviyesi, DNA, protein ve lipidler dahil olmak üzere hayati makromoleküllere zarar verebilir ve I/R-indük ovarian yaralanması gibi bazı patolojik olayların geliştirilmesinde önemli bir rol oynayabilirler. (31)Bu tür silinmiş etkiler foliküllerin sayısındaki azalma olarak temsil edilebilir (pre-antral ve antral), aynı zamanda inretik bedenlerin ve birpoptozun sayısındaki artış ve foliküllerde bir azalma olarak da temsil edilebilir. (10)ROS ve antioksidan etkiler arasındaki denge follüler büyüme ve maturasyondur, çünkü ROS'i azaltarak ve lipid peroxidasyonunu engelleyebilir, hücre hasarını arttırmaya ve fertilizasyon oranını ve embriyo gelişimini artırabilir. ROS birikimi birpoptoz etkiler. Shoorei ve al, osperidin tedavisinin Bcl-2 geninin (anti-apoptotic) ve Bax geninin (pro-apoptotic) mRNA seviyelerinde bir artışa yol açtığını buldu. Hesperidin aynı zamanda ROS üretimini engellemek için bulundu. AOPPs, stabiliteleri nedeniyle protein hasarı için güvenilir biyomarkers olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. (33)Daha önce, yüksek plazma veya serum AOPP, atherosclerosiste bozulma ile ilişkili olduğu bildirildi. (34)Bu çalışmada, AOPP hem serum hem de dokuda oksidatif protein hasarını tahmin etmek için ölçüldü ve ADSC tedavisi ovarian dokudaki AOPP seviyelerini azalttı ve serumu takip ettim. SOD ve sulfhydril grupları, hücreyi özgür radikal toksisiteye karşı koruyan önemli antioksidanlardır. (35)Önceki çalışmalarla ilgili olarak, doku SOD aktivitesi ovarian I/R modelinde bulundu. (35) . Shojafar ve al., I / R yaralanması deneysel bir model oluşturmak için farelerde otogresyona ve ADSC uygulama olmadan ikili oophorektomi/ototransplantasyon gerçekleştirdi. (36) Ayrıca, SOD'nin otogresyonlu ovaries'deki düşüşünü ve SOD'nin otogresyon+ grubunda artışlarını sundular. ADSC. Bununla birlikte, SOD aktivitesi mevcut çalışmada ADSCs ile tedaviden önemli ölçüde etkilenmedi. Ayrıca, doku TSH seviyeleri kontrol grubuna kıyasla ovarian torsion geçiren gruplarda azalmıştı ve TSH seviyeleri diğer gruplardan 2 grupta daha yüksekti. Bununla birlikte, bu bulgular istatistiksel olarak önemli değildi. Ayrıca, tüm gruplar arasında sistemsel SOD ve TSH seviyelerinde önemli bir fark yoktu.

I/R sırasında, ROS ve diğer biyolojik uyarıcılar, etkilenen siteye neutroil influxe yol açan enflamatuar hücreler aktive etti. MPO, aktif neutrophils tarafından serbest bırakılan, ROS ve HClO'nun oluşumuna neden olur. (37). MPO aktivitesi, ovarian I/R'den sonra önemli ölçüde artırıldı, ancak ADSC tedavisi sonrasında MPO aktivitesinde önemli bir azalma görüldü. Histolojik analiz bu gözlemle tutarlıydı; 3 grupta lenfosit infiltrasyon toplandı ve ADSC tedavisi sonrasında biraz azaldı.

Nitrik oksit (NO) vazodilasyonda önemli bir rol oynar, bağışıklık, inflamasyon ve apoptoz. Janus molekülü olarak, hiçbir şey hem yararlı hem de silici etkiler, örneğin eNOS veya iNOS gibi, (38)Bu çalışmada, ADSC tedavisinin grup 4'teki iNOS ifadesini 3 ile karşılaştırdığını buldular. Çeşitli çalışmalar, inflamasyon ve apoptoz ile birlikte göstermiştir. Eski araştırmalar, birpoptotik hücrelerin sayısının ovarian I/RR/R) deneysel modellerinde önemli ölçüde artırıldığını ortaya koydu. (8)Bu çalışmada, birpoptoz, TUNEL ve caspase-3 lekeleme ile immün olarak değerlendirildi. Manavella ve al. şiddetli bir kombine immüniteficient fareler ve intraperitonely transplanted ADSC fibrin'de yüklü beş farklı hastayı donmuş insan ovarian doku. TUNEL assay'daki ADSC-loaded grubunda önemli ölçüde daha az apoptotik folikül tespit edildiğini bildirdiler. (29)Bu çalışmada, ADSC tedavisi ile daha az sayıda apoptotik hücre TUNEL assay tarafından gösterildi. Testüler I/R yaralanması üzerine yayınlanan bazı benzer çalışmalar var. Moghimian et al. testüler I/R yaralanması ile sıçanlarda yapılan çalışmada, testosteron seviyesi arttı ve MDA seviyesi C vitamini ile tedavi alan 5 h testik torsion grubunda önemli ölçüde azaldı. Yazarlar bunun C vitamininin antioksidan etkisinin bir sonucu olabileceği sonucuna vardılar (39) Shokoohi ve al'ın çalışması, osperidin tedavisi alan sıçanlarda yapıldı, GPx ve SOD enzimlerinin serum seviyelerini artırdı ve testüler dokuda MDA'nın yüksek konsantrasyonlarını azalttı. Dahası, yazarlar Bax'i azaldığını ve Bcl-2 ifade seviyelerini artırdığını belirtti. Ayrıca, mikroplarda birpoptoz oranını belirgin bir şekilde azaltmışlardır. Yazarlar, bunun osperidin’in antioksidan etkisinin bir sonucu olabileceğini belirtti. (40). Ameli et al done-on sıçanların testüler torsion ile incelenmesinde, SOD, GPx ve testosteron düzeyleri, torsion/detorsion grubunda önemli ölçüde azaldı, ancak bu tedavi gruplarında tadalafil ve ve ve verapamil aldı. Tadalafil ve verapamil, testis doku hasarını koruyabilir ve testis fonksiyonunu testüler torsionidatif stresle bastırarak değiştirebilir. (41)Şu anki çalışmada, yazarlar ovarian dokudaki oxidatif stresin ischemia'dan sonra da artırıldığını buldular. Ayrıca, doku SOD aktivitesi ve apoptotik hücre sayısı grup 4. grupta önemli ölçüde azaldı. Bu bulgular, yukarıda bahsedilen çalışmalara benzer ADSC’nin antioksidan özelliklerinin sonucu olabilir.

Kök hücrelerin tedavi edici etkinliğini gösteren araştırmalara ek olarak, tümör-tropik bir yırtık kök hücreleri tümör vasculature formunu desteklemek ve ovarian kanser ilerlemesi geliştirmek için gösterildi. (42). ADSC'lerin meme kanserindeki tümör potansiyeli Eterno et al tarafından araştırıldı ve ADSC'lerin tümöregen olmadığını bildirdiler, ancak c-Met- ekspresion varlığında bir tümöre sahip olabilirler. (43)Böylece, benign jinekolojik bozukluklardaki kök hücrelerin kullanımı için önlemler tavsiye edilir.

Çalışmamızın gücü daha uzun iskemya süreleri kullanarak ve ovarian rezervini follüler say, anti-Müllerian hormon, inhibin B, egrad veya fecundity kullanarak artırılabilir. Ancak, sadece ADSC-given grubunun varlığı, ADSC’nin hasarsız ovary üzerindeki etkilerini görme açısından çalışmamızın güçlü bir tarafıdır.

Sonuç olarak, 6 saatlik torsion içinde uygulandığında, ADSC tedavisi ovarian I/R hasarına protein oxidasyonunu azaltarak ve iNOS ifadesini azaltabilir ve birpoptotik hücrelerin oranını azaltır. Mevcut çalışmanın sonuçlarına göre, ADSC'lerin umut verici bir yönü insan çalışmaları için aydınlatılmış olabilir ve sonunda ADSCs, ovarian torsion vakalarında potansiyel bir ön tedavi aracı olarak kullanılabilir.

Beyanlar

Yazar katkıları (CRediT)
Tüm yazarlar 14 CRediT rolünün tamamına eşit katkıda bulunmuştur (Conceptualization, Data curation, Formal analysis, Funding acquisition, Investigation, Methodology, Project administration, Resources, Software, Supervision, Validation, Visualization, Writing – original draft, Writing – review & editing).
Fon desteği

Funding information was not reported in the published version of this article.

Çıkar çatışması
The authors declared no conflict of interest.
Etik kurul onayı
The Dokuz Eylül University Ethics Committee for Animal Research approved the animal protocol for this study (Approval no. 28/2015).
Veri erişilebilirliği
A data availability statement was not reported in the published version of this article.

Kaynaklar (43)

43 kaynağın 38 tanesi DOI bağlantılı.

  1. Kart C, Aran T, Guven S, Karahan SC, Yulug E. Acute increase in plasma D- dimer level in ovarian torsion: An experimental study. Human Reproduction. 2011;26(3): 564–568 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  2. Taskin O, Birincioglu M, Aydin A, Buhur AU, Burak F, Yilmaz I, Wheeler JM. The effects of twisted ischaemic adnexa managed by detorsion on ovarian viability and histology: An ischaemia-reperfusion rodent model. Human Reproduction. 1998; 13(10): 2823–2827 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  3. Soltani M, Moghimian M, Abtahi H, S. M. The protective effect of Matricaria chamomilla extract on histological damage and oxidative stress induced by Torsion/Detorsion in adult rat ovary. International Journal of Womens Health and Reproduction Sciences. 2017;5(3): 187–192 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  4. Sezgin B, Kinci MF, Pirinççi F, Camuzcuoğlu A, Erel Ö, Neşelioğlu S, Camuzcuoğlu H. Thiol-disulfide status of patients with cervical cancer. Journal of Obstetrics and Gynaecology Research. 2020;46(11):2423-2429 PubMed Google Scholar
  5. Sezgin B, Pirinççi F, Camuzcuoğlu A, Erel Ö, Neşelioğlu S,Camuzcuoğlu H. Assessment of thiol disulfide balance in early‐stage endometrial cancer. Journal of Obstetrics and Gynaecology Research. 2020;46(7):1140-1147 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  6. Gharamaleki H, Parivar K, Soleimani Rad J, Roshangar L, Shariati M. Effects of electromagnetic field exposure during the prenatal period on biomarkers of oxidative stress and pathology of testis and testosterone level of adult rats in F1 generation. Acta Endocrinologica. 2014; 10(4): 577–587 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  7. Sapmaz Metin M, Topcu Tarladacalisir Y, Uz YH, Inan M, Omurlu IK, Cerkezkayabekir A, Kizilay G, Akpolat M. Vitamin E modulates apoptosis and c-jun N- terminal kinase activation in ovarian torsion-detorsion injury. Experimental and Molecular Pathology. 2013; 95(2): 213–219 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  8. KayaC., Turgut H, Cengiz H, Turan A, Ekin M, Yaşar L. Effect of detorsion alone and in combination with enoxaparin therapy on ovarian reserve and serum antimüllerian hormone levels in a rat ovarian torsion model. Fertility and Sterility. 2014;102(3):878-884 246 77 Stem Cells and Ovarian Torsion Kasap et al. DOI Crossref PubMed Google Scholar
  9. Parlakgumus HA, Aka Bolat F, Bulgan Kilicdag E, Simsek E, Parlakgumus A. Atorvastatin for ovarian torsion: Effects on follicle counts, AMH, and VEGF expression. European Journal of Obstetrics and Gynecology and Reproductive Biology. 2014;175: 186–190 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  10. Shokoohi M, Soltani M, Abtahi-Eivary SH, Niazi V, Poor M, Ravaei H, Salimnejad R, Moghimian M, Shoorei H. Effect of hydro-alcoholic extract of Olea europaea on apoptosis-related genes and oxidative stress in a rat model of torsion/detorsion-induced ovarian damage. Asian Pacific Journal of Reproduction. 2019;8(4): 148–156 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  11. Shokri F, Shokoohi M, Abadi ARR, Kalarestaghi H. The ameliorative effect of galega officinalis extract on histological damages, oxidative stress induced by torsion-detorsion in adult rats’ ovarian. International Journal of Women’s Health and Reproduction Sciences. 2019; 7(1): 119–123 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  12. Yuk JS, Kim LY, Shin JY, Choi DY, Kim TY, Lee JH. A national population-based study of the incidence of adnexal torsion in the Republic of Korea. International Journal of Gynecology and Obstetrics. 2015;129(2): 169–170 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  13. Takehara Y, Yabuuchi A, Ezoe K, Kuroda T, Yamadera R, Sano C, Murata N, Aida T, Nakama K, Aono F, Aoyama N, Kato K, Kato O. The restorative effects of adipose-derived mesenchymal stem cells on damaged ovarian function. Laboratory Investigation. 2013;93(2): 181–193 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  14. Liu XL, Zhang W, Tang SJ. Intracranial transplantation of human adipose-derived stem cells promotes the expression of neurotrophic factors and nerve repair in rats of cerebral ischemia-reperfusion injury. International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 2013;7(1): 174 –183 PubMed Google Scholar
  15. Gabr H, Rateb MA, El Sissy MH, Ahmed Seddiek H, Ali Abdelhameed Gouda S. The effect of bone marrow-derived mesenchymal stem cells on chemotherapy induced ovarian failure in albino rats. Microscopy Research and Technique. 2016;79(10): 938–947 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  16. Kilic S, Yuksel B, Pinarli F, Albayrak A, Boztok B, Delibasi T. Effect of stem cell application on Asherman syndrome, an experimental rat model. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 2014.;31(8): 975– 982 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  17. Wang Y, Shi G-wei, Wang H, Cao N-long, Fu Q. Adipose-derived stem cells seeded on polyglycolic acid for the treatment of stress urinary incontinence. World Journal of Urology. 2016;34(10): 1447–1455 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  18. Su J, Ding L, Cheng J, Yang J, Li X, Yan G, Sun H, Dai J, Hu Y. Transplantation of adipose -derived stem cells combined with collagen scaffolds restores ovarian function in a rat model of premature ovarian insufficiency. Human Reproduction. 2016;31(5): 1075–1086 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  19. Huang B, Lu J, Ding C, Zou Q, Wang W, Li H. Exosomes derived from human adipose mesenchymal stem cells improve ovary function of premature ovarian insufficiency by targeting SMAD. Stem Cell Research and Therapy. 2018;9(1): DOI Crossref PubMed Google Scholar
  20. Kurt O, Vatansever HS. Potential Clinical Use of Differentiated Cells From Embryonic or Mesencyhmal Stem Cells in Orthopaedic Problems. Current Stem Cell Research & Therapy. 2016;11(6): 522–529 PubMed Google Scholar
  21. Zhu SF, Hu HB, Xu HY, Fu XF, Peng DX, Su WY, He YL. Human umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation restores damaged ovaries. Journal of Cellular and Molecular Medicine. 2015;19(9): 2108–2117 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  22. Sun Y, Oberley LW, Li. A simple method for clinical assay of superoxide dismutase. Clinical Chemistry. 1988;34(3):497-500 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  23. Taylan E, Resmi H. The Analytical Performance of a Microplate Method for Total Sulfhydryl Measurement in Biological Samples. Turkish Journal of Biochemistry. 2010;35(3): 275– 278 PubMed Google Scholar
  24. Lowry Oh, Rosebrough Nj, Farr AlRR. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J Biol Chem. 1951;193(1):265- DOI Crossref PubMed Google Scholar
  25. Witko-Sarsat V, Friedlander M, Capeillère-Blandin C, Nguyen- Khoa T, Nguyen AT, Zingraff J, Jungers P, Descamps- Latscha B. Advanced oxidation protein products as a novel marker of oxidative stress in uremia. Kidney International. 1996;49(5): 1304–1313 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  26. Bradley PP, Priebat DA, Christensen RD, Rothstein G. Measurement of cutaneous inflammation: Estimation of neutrophil content with an enzyme marker. Journal of Investigative Dermatology. 1982;78(3): 206–209 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  27. Koike K, Moore FA, Moore EE, Trew CE, Banerjee A, Peterson VM. Endotoxin pretreatment inhibits neutrophil proliferation and function. Journal of Surgical Research. 1994;57(1): 49–54 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  28. Manavella DD, Cacciottola L, Payen VL, Amorim CA, Donnez J, Dolmans MM. Adipose tissue-derived stem cells boost vascularization in grafted ovarian tissue by growth factor secretion and differentiation into endothelial cell lineages. Molecular Human Reproduction. 2019;25(4):184–193 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  29. Manavella DD, Cacciottola L, Pommé S, Desmet CM, Jordan BF, Donnez J, Amorim CA, Dolmans MM. Two -step transplantation with adipose tissue-derived stem cells increases follicle survival by enhancing vascularization in xenografted frozen-thawed human ovarian tissue. Human Reproduction. 2018;33(6): 1107–1116 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  30. Sun H, Lu J, Li B, Chen S, Xiao X, Wang J, Wang J, Wang X. Partial regeneration of uterine horns in rats through adipose - derived stem cell sheets. Biology of Reproduction. 2018; 99(5): 1057–1069 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  31. Li C, Jackson RM. Reactive species mechanisms of cellular hypoxia- reoxygenation injury. In American Journal of Physiology - Cell Physiology. 2002; 282(2): 51-52 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  32. Shoorei H, Banimohammad M, Kebria MM, Afshar M, Taheri MMH, Shokoohi M, Farashah MSG, Eftekharzadeh M, Akhiani O, Gaspar R, Pazoki-Toroudi H. Hesperidin improves the follicular development in 3D culture of isolated preantral ovarian follicles of mice. Experimental Biology and Medicine. 2019;244(5): 352–361 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  33. Massy ZA, Nguyen-Khoa T. Oxidative stress and chronic renal failure: Markers and management. Int Journal of Nephrology. 2002;15(4): 336– 341 PubMed Google Scholar
  34. Liang X, Chen Y, Zhuang J, Zhang M, Xiong W, Guo H, Jiang F, Hu P, Guo D,Shi W. Advanced oxidation protein products as prognostic biomarkers for recovery from acute kidney injury after coronary artery bypass grafting. Biomarkers. 2012;17(6):507–512 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  35. Zelko IN, Mariani TJ, Folz RJ. Superoxide dismutase multigene family: A comparison of the CuZn-SOD (SOD1), Mn-SOD (SOD2), and EC-SOD (SOD3) gene structures, evolution, and expression. In Free Radical Biology and Medicine. 2002;33(3): 337–349 247 77 Stem Cells and Ovarian Torsion Kasap et al. DOI Crossref PubMed Google Scholar
  36. Shojafar E, Soleimani Mehranjani M, Shariatzadeh SMA. Adipose derived mesenchymal stem cells improve the structure and function of autografted mice ovaries through reducing oxidative stress and inflammation: A stereological and biochemical analysis. Tissue and Cell. 2019.;56: 23–30. DOI Crossref PubMed Google Scholar
  37. Hampton MB, Kettle AJ, Winterbourn CC. Inside the neutrophil phagosome: Oxidants, myeloperoxidase, and bacterial killing. In Blood. 1998;92(9): 3007–3017 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  38. Yang SR, Rahman I, Trosko JE., Kang KS. Oxidative stress-induced biomarkers for stem cell-based chemical screening. In Preventive Medicine. 2012;54:s 42–49 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  39. Moghimian M, Soltani M, Abtahi H, Shokoohi M. Effect of vitamin C on tissue damage and oxidative stress following tunica vaginalis flap coverage after testicular torsion. Journal of Pediatric Surgery. 2017;52(10): 1651–1655 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  40. Shokoohi M, Khaki A, Shoorei H, Khaki AA, Moghimian M, Abtahi-Eivary SH. Hesperidin attenuated apoptotic-related genes in testicle of a male rat model of varicocoele. Andrology. 2020; 8(1): 249–258 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  41. Ameli M, Hashemi MS, Moghimian M, Shokoohi M. Protective effect of tadalafil and verapamil on testicular function and oxidative stress after torsion/detorsion in adult male rat. Andrologia. 2018;50(8): e13068 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  42. Chu Y. Tang, Guo Y, Guo J, Huang B, Fang F, Cai J, Wang Z. Adipose-derived mesenchymal stem cells promote cell proliferation and invasion of epithelial ovarian cancer. Experimental Cell Research. 2015; 337(1): 16–27 DOI Crossref PubMed Google Scholar
  43. Eterno V, Zambelli A, Pavesi L, Villani L, Zanini V, Petrolo G, Manera S, Tuscano A, Amato A. Adipose -derived mesenchymal stem cells (ASCs) may favour breast cancer recurrence via HGF/c-Met signaling. Oncotarget. 2014;5(3): 613–633 DOI Crossref PubMed Google Scholar

Tam metni okuyun

PDF'yi burada aç

PDF yükleniyor…

PDF burada görünmezse yukarıdaki indirme düğmesini kullanın.

Bu makaleye nasıl atıf yapılır

Kasap B, Kasap S, Vatansever S, Kendirci R, Yilmaz O, Calisir M, et al. Protective Effects of Micro-Injected Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells on Ovarian Ischemia/Reperfusion Injury in Rats. Ulutas Med J. 2021;7(4):237-247. doi:10.5455/umj.20211019101154

Kasap, B., Kasap, S., Vatansever, S., Kendirci, R., Yilmaz, O., Calisir, M., Turkcu, U. O., Akin, M. N., Akbaba, E., & Turhan, N. O. (2021). Protective Effects of Micro-Injected Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells on Ovarian Ischemia/Reperfusion Injury in Rats. The Ulutas Medical Journal, 7(4), 237–247. https://doi.org/10.5455/umj.20211019101154

Kasap, B. et al. (2021) 'Protective Effects of Micro-Injected Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells on Ovarian Ischemia/Reperfusion Injury in Rats', The Ulutas Medical Journal, 7(4), pp. 237–247. doi: 10.5455/umj.20211019101154.

RIS (EndNote, Zotero) BibTeX JATS XML
Bu makaleyi sitenize ekleyin

Bu kodu sayfanıza yapıştırın. Kart başlığı, yazarları ve DOI'yi gösterir ve makaleye bağlantı verir.

Uyumsuzluk bildir
Makale gönder İletişim