Protective Effects of Micro-Injected Adipose-Derived Mesenchymal Stells on Ovarian Ischemia/Reperfusion Injury in Rats

مقدمة

Torsion of the adnexa, the circulation of the fallopian tube and ovary, accounts for 2.7−3% of gynecological emergencies (1)ونظراً لأن معظم الحالات تحدث في سن الإنجاب، فإن التشخيص المبكر والعلاج الفعال أمر حيوي للحفاظ على وظائف احتياطي المبيض والهرمونات. سالبينغو - أوفوريتريثي هو الخيار الإداري المفضل سابقاً بسبب مخاطر التهاب الأعضاء التناسلية والتشويش المحتمل مع ظهور مبيض للبيض؛ غير أن الدراسات الأخيرة توصي بالتشهير المبيض للمرضى الذين يرغبون في حماية خصوبةهم (2)- قد يؤدي عدم كفاية الشريان في نهاية المطاف إلى فقدان احتياطي المبيض بسبب الكيمياء. (3)- بعد إعادة دوام المبيض من جراء التمزق، تتطور أنواع عديدة من الأكسجين الرجعي، وهي المتطرفات الهيدروكسيلية، وبروكسيد الهيدروجين، وتطرفات الأوكسيد الفوقية بسبب زيادة مستويات الأكسجين (4, 5)The elevated ROS result in DNA damage, endothelial destruction, and apoptosis of granulosa cells (6, 7)- ولتحسين نتائج عمليات التخريب المبيض، تم التحقيق في العديد من العوامل الواعدة لمكافحة التهاب المسببات والمضادات للأكسدة، مثل الأتورفاتسين، وغاليغا غيريسيناليس، وأوليا يوروبايا، وكوسابارين(8–11)الخلايا الجذعية المستخرجة من الدهون البشرية مستمدة من الأنسجة الدهونية كنوع من المواد الأحيائية العليا التي يمكن أن تكون مناسبة للزراعة الشاملة والأدوية المتجددة (12):: توسيع نطاق التعاونيات المتعددة الأبعاد بشكل ثابت في ظل الظروف الثقافية الأساسية، مما يشكل خطراً متدنياً على التلوث، وينخفض رفضها بعد زرعها. (13) وتمتلك شركة ADSCs أيضاً خصائص مضادة للأكسدة ومضادة للالتهابات، وقد استخدمت مؤخراً في العديد من نماذج الجرذان I/R في الكبد والدماغ (12, 14)ويجري أيضاً التحقيق في خلايا السلب من أجل تطبيقات التوليد وأمراض النساء، مثل متلازمة آشرمان، وعدم قدرة البول على الإجهاد، والفشل المبيض قبل الأوان (15–17)وعلاوة على ذلك، أظهرت الدراسات السابقة أن الأسطوانات التي سرت من مراكز التعاون الزراعي يمكن أن تقاوم عملية الشيخوخة المبيضة الطبيعية (18)وقد ثبت في الآونة الأخيرة أن الكائنات البشرية المتولدة عن رابطة التعاون والتنمية في الميدان الاقتصادي تستعيد وظيفة الفشل المبيض السابق لأوانه عن طريق زيادة معدل الانتشار وتثبيط المعدل السكاني لخلايا غرانولوسا البشرية (19).

وفي هذه الدراسة، استهدفنا التحقيق في آثار مرض الإيدز في الإصابات الناجمة عن التهاب المبيض/عملية التشهير.

المواد والأساليب

الحيوانات

وقد خُصصت في هذه الدراسة ما مجموعه 25 جرذان بالغان، عذراء، من 10 إلى 12 أسبوعاً، من جرذان ويستار ألبينو. The animals (170−210 g) were housed under conditions of 20–24°C, 12-h of day/night cycles, and 50–60% humidity. ووافقت لجنة أخلاقيات بحوث الحيوانات التابعة لجامعة دوكوز إيلول على بروتوكول الحيوان لهذه الدراسة (الإعلان رقم 28/2015). وقد تطابقت التحقيقات المتعلقة ببحوث الحيوانات مع المبادئ التوجيهية التجريبية تمشيا مع لجنة الرعاية البشرية التابعة لجامعة دوكوز إيلول.

عزل الرابطة

ADSCs were isolated from five rats that were not allocated to experimental groups. Anesthesia was induced by intraperitoneal 10 mg/kg (Rompun, Bayer, Leverkusen, Germany) xylazine hydrochloride, and 50 mg/kg ketamine administration (Ketalar, Eczacibasi, Turkey). واستُخدم الحل المضاد للريبة في إعداد المواقع الجراحية وأُزيلت الأحزمة الدهونية الثنائية للزراعة. تم تجهيز الأنسجة المضغوطة بشكل كثيف في الساحل المعقم الفوسفاتي المكبل بنسبة 5 في المائة

Tissues were dissociated with scalpels and incubated for 30 min in Á-MEM containing 0.1% collagenase Type 1 at 37°C in a 5% CO₂وبعد ذلك نُقلت القضايا إلى وسائط الإعلام من أجل الثقافة (20 في المائة من مصل الجنين (FBS)، وAA-MEM، و1 في المائة من L-glutamine)، وبعد أن تعرضت للطرد المركزي مرتين، زُرعت في حاضنات رطبة في ألفا-MEM/10٪ من FBS، و50 ميكروغرام/مليلتر مكعب، و50٪ من البنسلين₂ (20)- تغيرت وسائط الإعلام كل يومين خلال فترة الزراعة التي دامت 10 أيام.

وصف التعاون التقني فيما بين البلدان النامية

The cells were fixed in 4% paraformaldehyde for 30 minutes in PBS and permeabilized for 15 min with 0.1 Triton X-100 (A4975, AppliChem, Darmstadt, Germany after washing with PBS. وقد نفذ نشاط الزنزانات المسببة للأكسدة المسببة للانقراض عن طريق احتضان 3 في المائة من أكسيد الهيدروجين (K31355100, Merck, Darmstadt, Germany) لـ 5 min عند درجة حرارة الغرفة. Afterward, cells were washed with PBS. After washing, cells were incubated in blocking serum for 1h in compliance with the manufacturer’s instructions (85-9043, Invitrogen, Camarillo, CA, USA). طُبقت الأجسام المضادة للفيروسات العكوسة المضادة للدبابات (Pa51037, Abcam) و anti-CD-44 (BA3382, BOSTER) عند حلول 1:25 و4 درجات مئوية بين عشية وضحاها (20)وأزيلت الأجسام المضادة الأولية وغسلت الخلايا بجهاز PBS. Biotinylated goat IgG, anti-rabbit/mouse IgGsecondary antibody, and peroxidase-conjugated streptavidin (D01-110, Life Science Division), were sequentially added, with each step incubated for 30 min. وقد غسلت الخلايا ثلاث مرات مع بي بي بي إس بين فترات الحبس هذه. وبعد ذلك، تم احتضان العينات بالديامينوبينزيدين/هيدروجين بيركسيد (00-2020، إنفيتروجين) لمدة 5 دقائق. واستُخدمت مادة " ميير " (HMM999)، ومختبرات " سيتيك " ، وغرب لوغان، وأوتاه، والولايات المتحدة الأمريكية) لأغراض المكافحة. وقد غُسلت الأنسجة في ماء مقطوع، مجهزة بمتوسط متصاعد (AML060, Scytek)، ومغطاة بالأغطية اللازمة للتقييم تحت المجهر الضوئي (Olympus BX40, Olympus Corp., Tokyo, Japan). وقد طُبقت نفس الإجراءات على عينات المراقبة باستخدام نفس النوع من الغازات الجليدية بدلاً من الأجسام المضادة الأولية.

مجموعات المعالجة

Animals were randomly distributed: group 1 (sham, saline n: 4), group 2 (ADSCs, n:7), group 3 (torsion + detorsion + saline, n:6), group 4 (torsion + detorsion + ADSCs, n:8).

الإجراءات الجراحية

وخضع الجرذان لعملية جراحية في مركز سوبيني تحت التخدير العام على النحو الوارد وصفه في عزاء الرابطة. After shaving and clean the surgical sites with antiseptic solution (Baticon, Drogsan, Turkey), 2.5-cm midline incisions were made.

المجموعة 1: أُطلِقَت صوراً مرئية للكورنيين والأدنكسا. ثمّ، 20 ميكرول سالين أُديرَ بشكل منفصل إلى المبيضاتِ مَع a مجهري. المجموعة 2: بعد الكشف عن الأدنكسا، 1 x 10⁵ تم إدارة الخلايا/الآداب المميتة في 20 ميكرول بي بي بي إس (بما في ذلك 2000 خلية من أكاسيد الديوكسينات المميتة) بصورة منفصلة إلى المبيضات التي تحتوي على حقن مصغر (13, 21).

المجموعة 3: من أجل خلق التوت، تناوبت الأدنكسا مع السفن الموصلة بـ 720 درجة على مدار الساعة، وتم ربط الأدنكسا المتناوبة بالجدار الخلفي بـ 5/0 خيوط حريرية. تم إغلاق شق جدار البطن وبعد فترة 6 ساعات من التورم، أُعيد التدوير من أجل الرعي (إعادة التدمير) عن طريق تناوب زوايا الفرن 720 درجة مقابل الساعة، وكشفت المبيضتان. ثمّ، 20 ميكرول سالين أُدير بشكل منفصل.

المجموعة 4: أُنجزت إجراءات القذف والتشهير بست ساعات على النحو المبين أعلاه. بعد أن تعرض المبيضات في إجراء الخرف، 1 x 10⁵ تم إدارة الخلايا/الآداب المميتة في 20 ميكرول بي بي بي إس (2000 خلية من أكاسيد الديوكسينات المميتة) بصورة منفصلة مع حقن مصغر (13, 21).

أُغلقت جميع الشقوق الجدارية مع 3/0 خيوط حريرية. After surgical recovery, animals were housed separately. وبعد 7 أيام من فترة التعافي، تعرضت جميع الحيوانات للتشويش، وأجريت عمليات استئصال الشوفان. وقام نفس الباحثين بتنفيذ جميع الإجراءات. One of the coupleed ovaries was selected randomly and fixed in 10% buffered formalin solution for histological and immunohistochemical analysis, while the other one waspacked in oiled foil paper for further biochemical analysis. قبل التضحية بالجرذان عن طريق الصدمة الافتراضية تم سحب 2 مل من الدم من الكافيا السفلي After 15 min centrifugation of blood samples at 5000 rpm, the serum was collected in Eppendorf tubes. The Eppendorf tubes and packages of ovaries in oiled foil papers were transferred to dry ice and stored at -20°C until final biochemical analysis.

الامتحانات المرضية

وحُددت عينات الاصدار لمدة 48 ساعة في حل رسمي عازل بنسبة 10 في المائة، وجُفِّضت عن طريق الكحول، وأُدرجت في البارافين. وقطعت كتل البارافين إلى أجزاء ذات مقياس 5 ميكرومتر (Leica RM2125RTS, Leica Biosystems, Nussloch, Germany). Hematoxylin and eosin staining was used as a routine protocol. وفحصت الأقسام لشدة الضرر المبيض، مثل الإيديما والالتهاب والنزيف والازدحام. وفحصت جميع الأقسام في إطار الاستنساخ الدقيق (Olympus BX40, Tokyo, Japan) باستخدام طريقة تحليل الصور (Image-Pro Plus 5.1). تم تحليل قسم القضايا من قبل نفس عالم التاريخ ذو الخبرة

التحليل الكيميائي

For immunohistochemical analysis, Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling (TUNEL), Bromode oxyuridine/5- Bromo-2'-deoxyuridine (BrdU), caspase-3, Endothelial nitric oxide synthase (eNOS), and inducible niasthide وقد صنفت كثافة وضع العلامات المناعية على النحو التالي: الضعف (+)؛ المعتدل (+)؛ القوي (+++). وقد أدى هذا التدرج مراقبان كانا يعميان من الظروف التجريبية.

TUNEL Assay

The slips were mounted with Entellan R (Merck 107961.0500) and examined by two histologists independently. 100 TUNEL- negative or positive- cells were counted per case on randomly chosen fields. وقد حُددت النسبة المئوية للزنزانات التي تملكها شبكة TUNEL.

Biochemical Analysis

وكانت الأنسجة الفوسفاتية المشعورة متجانسة في 20 ميلاً من طراز PH 7.4. عينات متجانسة تم حرقها مركزيا عند 14000 ريم عند 4^صفر C ل 15 دقيقة. After centrifugation, supernatants were divided into aliquots for analysis of superoxide dismutase (SOD) activity, advanced oxidation protein products (AOPP), total sulfhydryl (TSH), and total protein levels, while pellets were used for the myeloperoxidase (MPO) activity.

Measurement of SOD Activity

The SOD activity of ovarian tissues or serum was measured spectrophotometrically (22)- تم إعطاء أنشطة التخلص من الذخائر المتفجرة في المبيض والمصل كوحدات/ملغ بروتين ووحدات/مليلتر، على التوالي.

Assay of TSH

تم تقييم مستويات النسيج المبيض أو المصل في TSH بواسطة منحنى قياسي خطي تم تشكيله باستخدام الغلوتاثيون المخفض (23)تم قياس مستويات بروتين في المواد الخارقة مع سلفات الدوديسيل الصوديوم وفقاً لووري وآخرون (24)- أُعرب عن مستويات الصحة الإنجابية كميكرومول/مغم من البروتين والميكرومول/لتر للأنسجة أو المصل على التوالي.

تحديد المستويات

تم قياس مستويات النسيج المبيض في الأنسجة المبيضة والمصل وفقاً لطريقة المطياف في ويتكو - سارسات (25).

Assay of MPO Activity

واستُخدمت طريقة برادلي لقياس نشاط المنظمة في المبيض (26).

المجموع

تم قياس مستويات البروتين الإجمالية في الأنسجة المبيضة وفقاً لطريقة المطياف (27).

التحليل الإحصائي

وحدد أصحاب البلاغ حجم العينة من النتائج التي تم الحصول عليها من الجرذان والتي قيّموها بصورة أولية. From the differences, a domineering two-tailed Á value of 0.05 and a ß value of 0.20 (study power: 80%). SPSS version 22.0 software (Chicago, IL, USA) was used. وقُي ِّم تطبيع التوزيع مع اختبار شابيرو - ويلك. وتُعطى النتائج على أنها تعني خطأ معياري أو وسطي (عنصر الحد الأقصى). وقد تحددت الاختلافات بين المجموعات التجريبية عن طريق إجراء تحليل للاختلافات في اتجاه واحد (ANOVA) واختبارات التوكي اللاحقة. وقد استُخدم " كروسكال " - واليس " لتحليل البيانات غير المتماثلة. p0.05 اعتبر كبيرا.

النتائج

نتائج تصنيف ADSC

ADSCs were CD 34 (-) (negative) and CD 44 (+) (positive) (Fig.1). ADSCs were confirmed not to be hematopoietic stem cells as being CD34 (-) and confirmed to be adipogenic stem cells since they were CD44 (+).

النتائج التاريخية

In the gross examination, the color of the ovaries in groups 1, 2, and 4 were less ischemic than group 3. ولوحظت في المجموعة 1 تراكمات في الخلايا المبيضة وسفن الدم الصغيرة المليئة بالريثروت في الرطوبة المبيضة، في حين انخفضت هذه التغييرات بعد إدارة الرابطة في المجموعة 2. Intensely detected stromal fibroblast accumulation, infiltration and apoptotic cells in group 3 decreased after ADSC administration in group 4 than any other groups (Figure 2).

النتائج الكيميائية

ويبين الشكل 3 تحليل الأنسجة المشعّة للأنسجة المبيضة. No TUNEL-positive cells were observed in primary, secondary, or Graafian follicles in groups 1 and 2. However, apoptotic cells were detected in corona radiata and cumulus cells of Graafian follicles, and primary follicles of group 3. In group 4, TUNEL- positive cells were detected only in Graafian follicles, but in lower numbers than in group 3. وترد في الشكل 3، على التوالي، توزيعات المواد الكيميائية الخالدة للأجهزة المتفجرة المرتجلة، والجهاز الوطني للسواتل، والكاسباس - 3، والوحدة البريطانية. ويظهر الجدول 1 أيضاً مستوى تأثير سواتل TUNEL, iNOS, eNOS, Caspase-3, and BrdU staining levels in the groups. وكان لطخة البيردو ايجابية فقط في المجموعتين 2 و4 اللتين تؤكدان وجود أكاسيد الايدز في الأنسجة المبيضة بعد الحقن الفلكي.

النتائج الكيميائية الحيوية

وترد في الجدولين 2 و 3، على التوالي، مستويات تعادل القوة الشرائية في الأنسجة والمصل لجميع الفئات. مستويات النسيج AOPP كانت أعلى في المجموعة 3 منها في المجموعة 2 (p0.05, whereas levels of AOPP in group 4 were lower than those in groups 1 and 3 (p0.05 (الجدول 2). الفئة 3 أعلى من الفئة 1 و2 (الفئة 1 و2)p0.05)، في حين أنها انخفضت انخفاضاً كبيراً مقارنة بالمجموعة 3 بعد المعالجة بـ " ADSCs " في المجموعة 4 (المجموعة 4)p(الجدول 3) وترد في الجدولين 2 و3، على التوالي، أنشطة التخلص من الذخائر المتفجرة وبروميد الميثيل ومستويات الصحة الإنجابية في الأنسجة والمصل في جميع الفئات. وكان نشاط المادة المستنفدة للأوزون أقل بكثير في المجموعة 3 منه في المجموعة 1 (المجموعة 1)p0.05 وبالإضافة إلى ذلك، وجدنا أن نشاط التخلص من الذخائر المتفجرة في المجموعة 4 كان أقل بكثير مما كان عليه في المجموعتين 1 و2 (المجموعتان 1 و2)p0.05 (الجدول 2). وكان نشاط المنظمة في الأنسجة المبيضة في المجموعة 3 أكبر مما كان عليه في المجموعة 2 (المجموعة 2)p0.05 (الجدول 2).

المناقشة

It was hypothesized that since ADSCs have antioxidant and anti-inflammatory properties, they might improve the harmful effects of I/R injury caused by ovarian torsion/detorsion wound and the present study confirmed this by demonstrating that curriculum and serum AOPP, as well as curriculum SOD levels, were decreased after ADSC implementation. لذلك، فإن العلاج بالأدوية مع شركة ADSCs في نموذج للزراعة المبيضة قد يخفف من الأضرار المبيضة عن طريق تخفيض ROS في النسيج والمصل على حد سواء، مما يقلل من عدد الخلايا السكانية وعملية التهاب. وقد أُبلغ عن آراء كثيرة بشأن آثار وآلية التعاون والتنمية في الميدان الاقتصادي على العقم البشري والنظام الإنجابي مؤخرا. In a study by Manavella et al, ADSC differentiates into human vessels and promotes the secretion of VEGF when transplanted together with human ovarian tissue to mouse peritoneum using a two-step ovarian tissue grafting procedure (28)وذكروا أنه من المحتمل أن يؤدي هذا التعاون إلى تحسين نوعية الأنسجة المبيضة وعمرها. وفي منطقة أخرى من مانافيلا وآخرون، أظهر أصحاب البلاغ ارتفاع معدلات الأكسجين وتثقيف الأنسجة المبيضة مع شركة ADSC في الفترة المبكرة التالية للسرقة، مما يضاهي زيادة بقاء الجنين ويقلل من السكان. (29)وعلاوة على ذلك، وجدت شركة Sun et al أن صحائف شركة ADSC التي نقلت إلى رودري مستخرجة شجعت على تجديد خلايا الغدد الصماء والخلايا العضلية وحفزت المسببات، كما أسفرت عن نتائج أفضل للحمل (30)وكما يمكن فهمه من هذه البيانات، يبدو أن للتعاون التقني فيما بين البلدان النامية آثار إيجابية على النظام الانجابي البشري والعقم.

وقد تتسبب المستويات المرتفعة من نظام ROS في بعض الأضرار التي لحقت بالكروموليول الحيوية، بما في ذلك الحمض النووي، والبروتين، والشحوم، وتؤدي دوراً هاماً في تطوير بعض الأحداث المرضية مثل الإصابات المبيضة التي يسببها I/R. (31)وقد تمثل هذه الآثار الضارة كنقصان في عدد العضلات (المعروفة سابقاً والنباتية)، فضلاً عن زيادة عدد الهيئات العتيقة وتركيب خلايا الغرانولوزا في الخلايا العضلية. (10)9 - ويؤثر التوازن بين مادة ROS والمعادن المسببة للأكسدة في النمو والنضج بسبب أن المكملات المانعة للأكسدة عن طريق الحد من التلقيح الرئوي وتثبيط الأكسدة الدهونية يمكن أن تؤدي إلى منع إلحاق الضرر بالزنزانات، وتعزيز التنمية الجزيئية، وزيادة معدل التخصيب وتطوير الأجنة. The accumulation of ROS influences apoptosis. ووجدت شركة شوري وآخرون أن العلاج بالهيسبريدين أدى إلى زيادة وانخفاض في مستويات الجين Bcl-2 (anti-apoptotic) وBax gene (pro-apoptotic)، على التوالي. Hesperidin was also found to inhibit the generation of ROS. وقد استُخدمت هذه البرامج على نطاق واسع كعلامات بيولوجية موثوق بها لضرر البروتين المعالج بالأكسدة بسبب استقرارها (33)سابقاً، أُبلغ عن ارتفاع مستوى البلازما أو المصل الذي يرتبط بتدهور الترسبات الحرارية (34)وفي هذه الدراسة، قُسِّم البرنامج في كل من المصل والأنسجة لتقدير الأضرار التي لحقت بالبروتين المسببة للأكسدة والتي تبين بصورة قاطعة أن العلاج الذي يتلقاه المركز قد انخفض من مستوياته في الأنسجة المبيضة والمصل بعد الإصابة التي لحقت به. SOD and sulfhydryl groups are important antioxidants that protect the cell against free radical toxicity (35)وتماشياً مع الدراسات السابقة، وُجد انخفاض في نشاط النسيج SOD في نموذج المبيض I/R (35) :: أدّى شوجافار وآخرون عمليات الاستئصال الشوفوري/الزرع الثنائية مع أو بدون تنفيذ برنامج التعاون والتنمية في الميدان الاقتصادي إلى مبيضات ذاتية في الفئران لخلق نموذج تجريبي للإصابات من طراز I/R (36) They also presented the decrease of SOD in autografted ovaries and the increase of SOD in the group of autograft+ ADSC. However, SOD activity was not significantly affected by treatment with ADSCs in current study. وبالإضافة إلى ذلك، انخفضت مستويات الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية في الأنسجة في المجموعات التي تعرضت للإصابة بالمبيضة بالمقارنة مع مجموعة المراقبة 1، وكانت مستويات الصحة الجنسية والإنجابية أعلى في الفئة 2 منها في المجموعات الأخرى. ومع ذلك، لم تكن هذه النتائج ذات أهمية إحصائية. وبالإضافة إلى ذلك، لم تكن هناك اختلافات كبيرة بين جميع المجموعات في مستويات المواد المستنفدة للأوزون والصحة الجنسية والإنجابية.

During I/R, increased ROS and other biological stimulants activate inflammatory cells, leading to neutrophil influx into the affected site. MPO, released by actived neutrophils, causes the formation of ROS and HClO (37)وقد تبين أن نشاط الموظفين الفنيين المبتدئين قد زاد بدرجة كبيرة بعد عملية التبديل الأول/الR، ولكن لم يلاحظ حدوث انخفاض كبير في نشاط الموظفين الفنيين المبتدئين بعد أن لم يُلاحظ علاجهم. وكان التحليل التاريخي متسقاً مع هذه الملاحظة؛ وقد جُمعت عملية التسلل من اللمفوسيتي في المجموعة 3، وانخفضت إلى حد ما بعد العلاج من الإدمان.

وتؤدي أكسيد النيتريك دوراً أساسياً في التشرّد والحصانة والتهاب والتهاب السكان. As a Janus molecule, NO employs both useful and harmfulrious effects depending on its isoforms, such as eNOS or iNOS (38)وفي هذه الدراسة، وجدوا أن العلاج في إطار برنامج التعاون الإنمائي قد قلل من تعبير " iNOS " في المجموعة 4 بالمقارنة مع 3. وأظهرت عدة دراسات أنه إلى جانب الالتهاب والتشرد السكاني. وكشفت البحوث السابقة عن أن عدد الخلايا السكانية قد زاد زيادة كبيرة في النماذج التجريبية للمبيض I/R (8)- وفي هذه الدراسة، تم تقييم التخثر السكاني من مناعة من حيث الاختناق مع TUNEL و caspase-3 staining. Manavella et al. grafted frozen-thawed human ovarian curriculum of five different patients in severe immunodeficient mice and intraperitoneally transplanted ADSC loaded in fibrin. They reported that significantly fewer apoptotic follicles were detected in the ADSC-loaded group in the TUNEL assay (29)In this study, a reduced number of apoptotic cells with ADSC treatment was shown by TUNEL assay. وهناك بعض الدراسات المماثلة المنشورة عن الإصابة بالخصيتين I/R. In the study of Moghimian et al. conducted on rats with testicular I/R injury, the level of testosterone increased and MDA level decreased significantly in the 5 h testicular torsion group receiving treatment with vitamin C. وخلص صاحبا البلاغ إلى أن ذلك قد يكون نتيجة لأثر الفيتامين جيم المانع للأكسدة. (39) - وفي دراسة شوكوهي وآخرون التي أجريت على الجرذان التي تتلقى علاجاً من الهيسبريدين، زاد الهيسبريدين من مستويات المصل في إنزيمات غلوبال وسداسي الديوكس، وقلل من التركيزات المرتفعة للفئران في الأنسجة العضلية. Moreover, the authors stated that hesperidin decreased Bax and increased Bcl-2 expression levels. They also demonstrated a markedly diminished rate of apoptosis in germ cells. وخلص صاحبا البلاغ إلى أن ذلك قد يكون نتيجة لتأثير الهيسبريدين المانع للأكسدة. (40)In the study of Ameli et al conducted-on rats with testicular torsion, the levels of SOD, GPx, and testosterone were significantly decreased in the torsion/detorsion group while these increased in therapeutic groups receiving tadalafil and verapamil. يمكن لـ(تادالافيل) و(الفيرابيل) حماية ضرر الأنسجة الشهيرة والاستعاضة عن وظيفة الخصيتين بقمع الإجهاد الأكسجيني بعد التوت (41)وفي الدراسة الحالية، وجد أصحاب البلاغ أن الإجهاد الأوكسدي في الأنسجة المبيضة زاد أيضاً بعد إيزيميا. وعلاوة على ذلك، تبين أن نشاط النسيج SOD ورقم الخلايا السكانية قد انخفض بدرجة كبيرة في المجموعة 4. وقد تكون هذه النتائج نتيجة لممتلكات مضادة للأكسدة في شركة ADSC، على غرار الدراسات المذكورة أعلاه.

In addition to investigations showing the the therapeutic efficacy of stem cells, tumor-tropic adipose stem cells have been shown to support tumor vasculature formation, and enhance ovarian cancer progression (42)The tumorigenic potential of ADSCs in breast cancer was investigated by Eterno et al and reported that ADSCs were not tumorigenic but they might possess a tumorigenic potential in presence of c-Met-expression (43)ومن ثم، يُشار إلى الاحتياطات اللازمة لاستخدام الخلايا الجذعية في الاضطرابات النسائية الضارة.

وقد تكون قوة دراستنا قد زادت باستخدام فترات أطول من الكيميائيات وبكشف الاحتياط المبيض عن طريق العد الجزيئي، أو الهرمون المضاد للموليريين، أو إيبين باء، أو الاستراديوول، أو الجنين. غير أن وجود مجموعة " ADSC-given " هو جانب قوي من دراستنا من حيث رؤية آثار " ADSC " على المبيض غير المدمر.

In conclusion, if administered within 6 hours of torsion, ADSC treatment might protect against ovarian I/R damage by declining protein oxidation and iNOS expression, attenuating lymphocyte infiltration, and reducing the incidence of apoptotic cells. According to the results of the present study, a promising aspect of ADSCs might have lightened for human studies and finally, ADSCs can be used as a potential adjuvant treatment agent in ovarian torsion cases.