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综述 · 开放获取

聚聚氨酯链反应对已知的阿尔法·塔拉西米亚切除术的筛选

标题、摘要和全文为机器翻译。 英文原文

  • Kiran Tauseef Bukhari1
  • Nouman Noor2
  • Sadaf Humayoun3
  • Humaira Zafar4
  • Noor Khan Lakhnana5
  1. Pathology Consultant Haematologist, Al Nafees Med College, Isra University Islamabad Campus, Pakistan ROR
  2. Operative Dentistry, Rawal Dental Collage, Rawal Institue of Health Sciences, Islamabad, Pakistan
  3. Senior Registrar, Rawal Dental Collage, Rawal Institute of Health Sciences, Islamabad, Pakistan
  4. Pathology Consultant Microbiologist, Al Nafees Med College, Isra University, Islamabad Campus, Pakistan ROR
  5. Pathology Consultant Histopathologist, Al Nafees Med College, Isra University, Islamabad Campus, Pakistan ROR
下载 PDF (431.9 KB) 引用方式 doi:10.5455/umj.20170608074047

摘要

Thalassemia是血红蛋白多肽链合成在数量上继承的紊乱. 对我国巴基斯坦疾病确切频率的认识,以及对诊断和预防方法的适当了解,将是巴基斯坦防治地中海贫血的一个步骤。 拟议审查条款将提供关于巴基斯坦和国际新生儿地中海贫血的确切频率和分布的最新资料。 所有这些都最终为巴基斯坦制定地中海贫血症预防和控制方案的政策提供了巨大帮助。 Thalassemia是血红蛋白多肽链合成在数量上继承的紊乱. 对我国巴基斯坦疾病确切频率的认识,以及对诊断和预防方法的适当了解,将是巴基斯坦防治地中海贫血的一个步骤。 拟议审查条款将提供关于巴基斯坦和国际新生儿地中海贫血的确切频率和分布的最新资料。 所有这些都最终为巴基斯坦制定地中海贫血症预防和控制方案的政策提供了巨大帮助.

关键词

全文

全文为机器翻译；以英文原文为准。 英文原文

导言

遗传的门德尔利安血液紊乱症(英語:Thalassemia)是一种自体沉降性紊乱症,其特征是α(α)或β(β)光蛋白或Haemoglobin分子的多肽链异常.(1, 2)根据基本病理学和临床狂躁症,这些病症完全可以归类为α或β地中海贫血症。(3).95%以上的异羟基,α地中海贫血可以表现为一种或两种染色体中的α光蛋白基因被删除。(1, 4, 5)与其它定性血红蛋白病原不同的是,地中海贫血被认为是血红蛋白的定量多肽光蛋白链异常。 然而,α地中海贫血因一个或多个α链基因被删除而表现出来,通常位于16号染色体的短臂上. 虽然,疾病的严重程度被认为与被删除的基因数量直接相关. 甲型地中海贫血分为四类如下: (6)数字 :

一、导 言 Hb酒吧或Hydrops fetalis(Homozygous状态): 这是由于所有四个α基因的删除. 因此,由于完全抑制了所有四种α光子链合成,它被康西-德雷德作为最严重的形式. (3, 6)。 。 。

二. 乙型六氯环己烷: 它在三个α链中被删除,从而产生β光斌链四聚体(β)页:1(原始内容存档于2018-09-29). e HbH. 这种形态通常会像海因茨尸体一样在受影响的红细胞内发生 (3, 6)。 。 。

页:1 α-地中海贫血特征: 这种形态是两个α基因删除的结果.

页:1 α-地中海贫血特质(载体): 在这个类型中,只看到一个α基因的删除 (3)。 。 。

α-地中海贫血-2的异构态通常与任何血液或临床异常无关. 然而,在一些异构的α-地中海贫血-1或同构的α-地中海贫血-2中,患者可能呈现微囊和低血色RBC形态的温和形式. 这种帕-指针在一生中通常在临床上保持沉默. 危机只有在与其他地中海贫血基因或疾病的相互作用开始时才开始,这种相互作用最终会改变疾病酚型,从而在临床上变得重要. 血红蛋白H(HbH)病是严重的α-拉西米病的重要例子之一. 这通常是α-地中海贫血-1和α-地中海贫血-2相互作用的结果. (7, 8)。 。 。

因此,这种疾病完全可以通过将缺陷基因正确引入血球区间或单干细胞移植来治愈. Raja etal的研究报告;2012年显示,由于现有基因转移载体的限制,基因转移结果不成功。 (4)。 。 。

Hb产量的减少最终将导致疾病的特征和症状. 其中最常见和最突出的包括:红血球高血压、严重组织缺氧、血解性贫血、铁超载、肝细胞等。 (6)诊断患有严重形式的地中海贫血症的高发病风险个人始终是减少地中海贫血患者痛苦的关键武器 (9)Zorai等人;2002年,根据他的研究得出结论,简单的血液全貌与Hb电泳研究一起,为诊断地中海贫血提供了宝贵的资料。 (10). Pornprasert S etal;2011年,启迪了对所有高风险载体热评估夫妇进行筛选的必要性 (11)Munkongdee T etal;2010年;Chamras U etal;2009年和Prathomtanapong P etal,2009年进行了分子诊断研究,以评估世界不同南亚地区地中海贫血的基因突变类型 (12–14)他们的结论是,为了上述目的,多聚化链式反应研究将大有帮助。 (11, 15)。 。 。

产前诊断、输血疗法和基于人类leucocyte抗原(HLA)打字的过敏骨髓移植, (16) 被认为是最常见的管理选择。 然而,各种研究也强调,只有根据卫生组织的指南,为具体地点制定标准协议,才能提高地中海贫血症的存活率。 (17–20)。 。 。

与世界许多地区一样, Khateeb B等人的一份研究报告;2000年得出的结论是,巴基斯坦迫切需要控制和预防地中海贫血症。 (21)。 。 。

文学评论

在非洲、中东、地中海盆地、巴基斯坦、东南亚和美国(美国)的撒哈拉以南地区观察到α地中海贫血的高流行率(22–24)估计美国甲型地中海贫血的流行率为30%。 (22). 一种轻度的微囊性低血压性贫血通常被视为同位素异狄维二元中的临床表现. 美国西部通常存在HbH和Hb Bart hydrops胎儿综合征等严重疾病。 (25)在Hb Bart的hydrops fetalis综合征中,这些个体几乎没有或根本没有α光蛋链。 这通常会导致严重的贫血,最终导致新生儿高死亡率。 Gapor SA etal;2009年,在马来西亚半岛东北部的Perak州和Kelantan州进行了流行率研究。 他发现,马来语人口的流行率(9.25%)很高。 (单位:千美元)-thalassemia-2 加上3.7的删除基因dale-tions,与其他族群相比. 其中n=34(8%)为异辛醇/水分配系数 α- 缩略语3.7 删除,n=1(0.25%)为异辛酸 (单位:千美元)4.2 删除,和n=2(0.5%)是SEA类型删除的异构-zy. 他还描述了: (单位:千美元)-thalassemia with 3.7删除是16号染色体上最常见的突变类型,在全球各地可见. (26, 27). Mouélé R etal;2000年,在巴西进行了一项研究,并叙述了删除3.7的类似结果,这是α地中海贫血最常见的结果。 (28)。 。 。

在Sriroong-rueng W etal,1997年和Zygulska M etal 1996年的另外两项流行率研究表明, (单位:千美元) 有3.7基因删除的地中海贫血症在16%的异氮化物和1.2%。 然而,在泰国南部,观察到α-thal 2和α-thal 1的发病率分别为12.0%和4.3%。 (29, 30)。 。 。

Khan SA等人;2003年,在巴基斯坦进行了一项研究,并描述了在信德人体内检测到的α(4.2 alle). 然而,在信德邦Balouchis和旁遮普邦发现了αα(反3.7)阿莱尔。 (31)Akbari MT etal也观察到类似的发现;2012年。 他还说,–α-3.7、-α4.2、-α20.5和-MED是负责任的基因。 (32)Verma IC等人;2007年,研究了来自巴基斯坦、伊朗和印度的325名地中海贫血介质患者,并得出结论,最常见的突变是 " alpha-thal " (33)。 。 。

Finlayson J 等人;2012年,在奥斯特拉利亚进行了一项研究,并得出结论说,位于Codon 43 和第二座HBA2:c的两具帧过渡突变负责α-地中海贫血特异性 (34)地中海贫血的发病率在发展中国家较高。 然而,文献审查发现,在世界不同地区地中海贫血症的确切频率和确切突变方面,存在严重缺陷。 (5)。 。 。

结论

95%以上的异羟基,α-拉西米血症可以表现为染色体的一个或两个α光蛋白基因的删除——约16p13.3.

PCR被认为是准确检测地中海贫血突变从而诊断的可靠测试.

建议• PCR(聚合链反应)的婚前和产前筛查协议将有助于减少地中海贫血患者的病痛。

• 预防疾病的遗传咨询在婚前是必要的

常规PCR程序

DNA 提取物:μltra 基因TM 电话 (Anagen Technologies,Inc.,U.S.A)或任何其他优质工具包。 从每个病人身上抽取2.5毫升的毒血,在EDTA管中,按照包中的协议用于DNA提取,以净化全血的DNA. DNA保存在–70°c,待进一步使用.

磁盘

根据HLA方案,PCR在热循环器中运行2小时左右,包括以下基本步骤。 不同步骤的时间可能不同。

a. 最初饱和度为940 个C为5分钟b. 94饱和0 个30秒C 62分Annaling0 个C 1分钟d. 72分延长0 个C 1分钟e. 重复步骤b-d 30 次 f. 最终扩展为72次0 个C 10分钟

Agarose Gel 准备

2%的Agarose凝胶是通过将2克的Agarose粉末Scharlau AG 0032 Agarose高EO电泳级(西班牙巴塞罗那Scharlau Chemie S.A)与100毫升蒸馏水中10X TBE缓冲器混合制备. Aga-玫瑰凝胶通过微波炉加热制备,直到透明. 这个溶液被倒在了甘油凝胶的铸造托盘上,上面已经放置了梳子. 凝胶在凝胶凝固20分钟后被移除. 1μl的放大DNA产物被装入甘油胶井.

阿加罗斯·盖尔·小动物

电phoresis罐装有10倍稀释的10X TBE缓冲器,与供电相连,加载的garose凝胶在150V运行约25分钟.

用0.01%的乙二醇溴溶液进行15分钟的沉淀,以可视化地通过甘糖凝胶电泳来发现不存在或存在放大的PCR产品。

Agarose Gel Electropro上的放大PCR产品可视化. 由紫外线照明器

在涂抹了0.01%的乙二醇溴后,可视化凝胶用于紫外线转光器上的波段和根据放大的PCR产品存在的波段分配的亚麻油。

为研究准备试剂

• 初级设计初级设计由WEBSITE NCVI帮助完成,TOOL USED为db SNP. 在设计你所需基因的原始素后, 给Fermantas公司定了订单 来制造和交付原始素

重构初级程序

Primer重组调整为20 pmol,公式使用:4/OD×300=X(μl),其中X(μl)是用于配制含Distil水的300μl初级器的量,OD是重新配制的初级器的吸收. OD是写在初级小瓶上。

dNTP 4个dNTP(Adenine、Guine、Thymine、Cytosine)中的每个DNTP的制备(淋巴)10 μl o 460 μl 蒸馏水o 混合两个

控制底线

在每个PCR中,包含一个控制底物对子,可以放大一个已知的基因,而这个基因对我们没有兴趣,或者没有在研究中. 这些底物放大了已知的不需要Allelic序列,从而发挥内部正放大控制的作用.

TBE 缓冲

o Tris 108 g o Boric acid 55 g o Na2EDTA 9.3 g o 蒸馏水 1升 TBE 缓冲器用于电圈槽(10次稀释为10X TBE缓冲器) o 10X TBE 缓冲器 150 ml o 蒸馏水 1350 ml 用作污损的Ethidium 溴粉 20 μl o Distil 水 200 ml 用于研究目的 PCR Mix 准备 PCR 混合剂(1个测试) 用于试剂后. 有些变化是可能的。

a. 10X Taq 缓冲30μl b. MgCl2个 24μl c. 2mMdNTPs 30μl d. 蒸馏水 200μl e. 控制导体 C3个 35μl f. 控制导体 C页:1 35μl g. 溴酚蓝染料 2μl 在PCR组合中添加了以下内容; a. DNA 50μl b. Taq 6μl

PCR 主混音器 (商业可用) PCR Master Mix 也可以使用Commer- cially(英语:Commer-cially). 常用的Master混音是Solis bioDyne的. 此外,我们增加了以前孤立的病人的Dna, 基因的原始人想要放大。 PCR程序在热循环器上运行. 和凝胶可视化 基因带在uv光辉剂。

声明

作者贡献（CRediT）
所有作者对全部 14 项 CRediT 角色贡献均等（Conceptualization, Data curation, Formal analysis, Funding acquisition, Investigation, Methodology, Project administration, Resources, Software, Supervision, Validation, Visualization, Writing – original draft, Writing – review & editing）。
资助

No financial support was used for the study.

利益冲突
A conflict of interest statement was not reported in the published version of this article.
伦理批准
Ethics committee approval was not required for this article, as it is based on previously published literature and does not involve human participants, patient data or animals.
数据可用性
Data sharing is not applicable to this article as no new data were created or analysed in this study.

参考文献 (34)

34 条参考文献中有 22 条已链接 DOI。

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Bukhari KT, Noor N, Humayoun S, Zafar H, Lakhnana NK. Screening for the Known Αlpha Thalassemia Deletions by Polymerase Chain Reaction. Ulutas Med J. 2017;3(4):59-64. doi:10.5455/umj.20170608074047

Bukhari, K. T., Noor, N., Humayoun, S., Zafar, H., & Lakhnana, N. K. (2017). Screening for the Known Αlpha Thalassemia Deletions by Polymerase Chain Reaction. The Ulutas Medical Journal, 3(4), 59–64. https://doi.org/10.5455/umj.20170608074047

Bukhari, K.T. et al. (2017) 'Screening for the Known Αlpha Thalassemia Deletions by Polymerase Chain Reaction', The Ulutas Medical Journal, 3(4), pp. 59–64. doi: 10.5455/umj.20170608074047.

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